Ghrelin在糖尿病大鼠表達及影響因素研究.pdf

1、研究背景 隨著人們生活水平的提高、生活方式的改變和壽命的延長，肥胖癥(obesitv，OB)、糖尿病(diabetes mellitus，DM)等代謝性疾病的發(fā)生率逐年上升，而人們對生活質量要求以及對此類疾病長期危害性認識的提高使其日益受到重視。日前，有關能量代謝平衡方面的研究深受內分泌界的關注。 第一部分，2型糖尿病大鼠ghrelin表達及吡格列酮干預 研究目的：本研究通過高脂飲食聯合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)

2、誘導建立2型糖尿病大鼠模型，并給予吡格列酮干預治療，檢測其血漿ghrelin和血清瘦素、胰島素水平，測定胃壁組織ghrelin mRNA和蛋白表達情況，從而探討ghrelin在2型糖尿病大鼠的表達及吡格列酮干預治療的影響，揭示在2型糖尿病大鼠ghrelin與瘦素、胰島素等的相互關系及其意義。 方法：選擇SPF級近交系雄性健康Wistar大鼠40只，分為3組：正常對照組(NC組)、糖尿病吡格列酮治療組(DM-PIO組)和糖尿病未治

3、療組(DM組)。適應性喂養(yǎng)7天后，NC組飼以標準飼料，其余予以高脂飼料。8周后，DM和DM-PIO組大鼠一次性左下腹腔注射STZ(30mg/Kg體重)成模。10周時開始，DM-PIO組給予吡格列酮(20mg/kg)每日灌胃，DM組和NC組以等體積的高壓消毒水灌胃。18周處死大鼠，心臟取血并留取胃組織。分別進行血糖、血脂、游離脂肪酸、胰島素、瘦素、ghrelin水平測定，計算胰島素抵抗指數(HOMA-IR)；RT-PCR和免疫組織化學法分

4、別測定胃壁組織ghrelin mRNA及蛋白表達情況。采用s：PSS 11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。p<0.05表示有統(tǒng)計學意義。 結果： 1．8周時，實驗組大鼠體重明顯升高(P<0.01)，血TG、FINS和HOMA-IR均顯著高于NC組(盼別小于0.05，0.01，0.05)， FBG和TC水平兩組間無顯著差異(P>0.05)；實驗組大鼠葡萄糖耐量實驗30min和60min血糖顯著高于NC組(胸小于0.05)。

5、 2．10周成模后，實驗組葡萄糖耐量試驗在0min、30min、60min和120min血糖均明顯高于NC組(P分別小于0.05、0.01、0.01、0.01)。 3．18周時，DM-PIO組和DM組大鼠體重仍顯著高于NC組(P分別小于0.01，0.05，)，同時DM-PIO組大鼠較DM組亦顯著增加(P<0.05)。 4．18周時DM-PIO組與DM組比較，血FBG、FINS、TG和TC水平有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意

6、義(P>0.05)：血FFA、HOMA-IR和血清瘦素水平則顯著降低(P均小于0.05)，但都仍顯著高于NC組(P分別小于0.01，0.01，0.05)。 5．18周時，DM組血漿ghrelin水平顯著低于NC組(P<0.05)，DM-PIO組較DM組有上升趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，仍顯著低于NC組(P<0.05)。相關分析顯示，糖尿病大鼠血漿ghrelin水平與體重(r=-0.413，P<0.05)、HOMA-

7、IR(r=-0.549，P<0.01)和瘦素水平(r=-0.470，P<0.05)呈顯著負相關關系。 6．DM-PIO組和DM組大鼠胃壁組織ghrelin mRNA表達均顯著低于NC組(P均 <0.01)；DM-PIO組和DM組相比，ghrelin mRNA表達有升高趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 7．與NC組相比，DM組和DM-PIO組胃底部細胞ghreilin陽性染色顆粒明顯減少，且DM組LkDM-PIO組減

8、少更明顯。IMS細胞圖像分析系統(tǒng)顯示，DM組和DM-PIO組陽性染色面積均顯著低于NC組(胸小于0.05)，DM組較DM-PIO組有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P)0.05)。 結論： 1．高脂飼料聯合小劑量STZ腹腔內注射建立的2型糖尿病模型與人類2型糖尿病的發(fā)病過程和臨床及生化特點相似，而且造模過程簡單易行，是目前研究人類2型糖尿病較理想的動物模型。 2．2型糖尿病大鼠血漿ghrelin及其在胃壁組織的mR

9、NA或蛋白表達水平均顯著低于正常對照組，說明在2型糖尿病大Nghrelin呈現低表達，低ghrelin水平可以作為2型糖尿病的一個危險因子。 3．2型糖尿病大鼠血清胰島素水平和HOMA-IR顯著高于對照組，血漿ghrelin水平與HOMA-IR呈負相關關系。低ghrelin水平可能在2型糖尿病的高胰島素血癥和胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 4．2型糖尿病大鼠血清瘦素水平顯著高于NC組，血漿ghrelin水平與血清瘦素

10、水平呈負相關關系，提示2型糖尿病大鼠的低ghrelin和高瘦素水平是對能量平衡的正適應，ghrelin可能參與瘦素抵抗。 5．吡格列酮可顯著降低2型糖尿病大鼠的血FFA和瘦素水平，降低HOMA-IR，改善2型糖尿病大鼠的胰島素抵抗和瘦素抵抗。 6．吡格列酮對2型糖尿病大鼠的血漿ghrelin水平及其胃壁組織表達未發(fā)現有顯著影響。 第二部分STZ糖尿病大鼠Ghrelin表達及重組瘦素治療的影響 目的：本研究

11、通過較大劑量STZ腹腔注射建立胰島素缺乏糖尿病大鼠模型，并給予重組瘦素治療，觀察注射前后大鼠攝食改變及體重、血糖、胰島素、瘦素和ghrelin水平變化，治療后瘦素在脂肪組織mRNA表達及ghrelin在胃壁組織mRNA表達情況，探討重組瘦素治療對STZ糖尿病大鼠ghrelin表達的影響，揭示在STZ糖尿病大鼠ghrelin和瘦素的相互作用關系及可能機制。 結果： 1．瘦素治療前，DM組、DM-LEP組和DM-PF組大鼠攝

12、食量、空腹血糖、胰島素、瘦素ghrelin水平ISI均與對照組有顯著差別，各糖尿病組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2．瘦素治療后DM．LEP組大鼠攝食量較DM組顯著減少(P<0.05)，仍顯著高于NC組(P<0.05)：DM-LEP組大鼠體重較DM組及DM-PF組均顯著增加(P均<0.05)，但仍顯著低于NC組(P<0.05)。 3．瘦素治療后，DM-LEP組大鼠血糖水平顯著低于DM組和DM-PF組(P均<0.0

13、5)，但與NC組比較仍有顯著差別(P<0.01)。DM-LEP組與DM組、DM-PF組比較，血清胰島素水平在瘦素治療第3天和第7天均無差別(P均大于0.05)，但治療第7天DM-LEP組ISI顯著高于DM組和DM-PF組(P均<0.05) 。 4．瘦素治療第3天和第7天，DM-LEP組的血清瘦素水平均顯著高于DM組(P分別小于0.05，0.01)和DM-PF組(盼別小于0.05；0.01)：，但與NC組比較仍有顯著差別(盼別小于

14、0.01和0.05)。同時發(fā)現，DM-LEP組大鼠第7天的血清瘦素水平顯著高于第3天(P0.05)。 5．DM組、DM-LEP組和DM-PF組大鼠脂肪組織瘦素mRNA表達相對系數均顯著低于NC組(盼別小于0.01，0.05，0.01)；DM-LEP組與DM組及DM-PF組相比，脂肪組織瘦素mRNA表達水平顯著升高(P均<0.05)。 6．瘦素治療后第3天和第7天，DM-LEP組大鼠血漿ghrelin水平顯著低于DM組(盼

15、別小于0.05，0.01)和DM-PF組(盼別小于0.05，0.01)，但仍明顯高于NC組(胸<0.05)。 7．DM組、DM-LEP組和DM-PF大鼠胃壁組織ghrelin mRNA表達相對系數均顯著高于NC組(盼別小于0.01，0.05，0.01)；DM-LEP組與DM組及DM-PF組相比，大鼠胃壁組織ghrelin mRNA表達水平顯著降低(P均<0.05)。 結論： 1．STZ糖尿病大鼠表現出多食、體重下

16、降、高血糖、血清胰島素水平降低等1型糖尿病臨床特點。 2．STZ糖尿病大鼠血漿ghrelin及其胃壁組織mRNA表達水平增高，血清瘦素及其脂肪組織mRNA表達水平下降。 3．瘦素治療可使STZ糖尿病大鼠多食改善，體重回升，空腹血糖水平下降，且血糖下降與瘦素抑制攝食作用無關。 4．瘦素治療不改變空腹胰島素水平，但可使STZ糖尿病大鼠胰島素敏感指數升高。 5．瘦素治療可使STZ糖尿病大鼠降低的血清瘦素及其脂