N-琥珀酰殼聚糖載siRNA納米?？鼓[瘤作用研究.pdf

1、殼聚糖是一種天然高分子化合物，是甲殼素脫乙酰基反應(yīng)的產(chǎn)物，由于其低毒性和良好的生物相容性，近階段逐步應(yīng)用于藥物載體等方面的研究。然而其較大的分子量和無(wú)規(guī)則的空間結(jié)構(gòu)致使其溶解性能較差，因此在醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用受到了限制。N-琥珀酰殼聚糖是殼聚糖的N-?；苌?，由殼聚糖和丁二酸酐合成而得。N-琥珀酰殼聚糖較殼聚糖溶解性能有較大改善，且具備殼聚糖在生物體內(nèi)相容性好、無(wú)毒性和粘附性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此拓寬了殼聚糖的應(yīng)用范圍，是一種性能優(yōu)異、前景開(kāi)闊

2、的載藥體介質(zhì)。
　　本文首先通過(guò)乙酸/乙醇體系制備了DS為58％的N-琥珀酰殼聚糖，隨后我們對(duì)合成的N-琥珀酰殼聚糖進(jìn)行體外抗腫瘤的細(xì)胞活性評(píng)價(jià)，通過(guò)熒光標(biāo)記N-琥珀酰殼聚糖，分別測(cè)定三種不同的腫瘤細(xì)胞MCF-7，A549，H460對(duì)N-琥珀酰殼聚糖的攝取量，并通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制率。我們對(duì)轉(zhuǎn)染時(shí)間，轉(zhuǎn)染劑量，轉(zhuǎn)染細(xì)胞等條件進(jìn)行了篩選，確定最終最佳的轉(zhuǎn)染條件為對(duì)H460細(xì)胞以200μg/mL進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
　　

3、本文對(duì)N-琥珀酰殼聚糖進(jìn)行了納米粒子化，通過(guò)自組裝法制備了具有載siRNA能力的N-琥珀酰殼聚糖納米粒，并對(duì)其載藥性能進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)所得N-琥珀酰殼聚糖納米粒經(jīng)粒度分析后，所測(cè)得的粒徑約分布在150～200nm，表面電位為+8～20mV，納米粒體系較為穩(wěn)定，TEM分析納米粒表面形態(tài)，從透鏡照片可以看出納米粒的形態(tài)完整;通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳及紫外分光光度儀對(duì)N-琥珀酰殼聚糖納米粒的載藥性能進(jìn)行了測(cè)試，其中以1∶1比例制得的N-琥珀酰殼聚糖

4、納米粒的載siRNA能力較為優(yōu)秀，包封率達(dá)到了95.28％。
　　本文對(duì)載以VEGF基因?yàn)榘谢虻膕iRNA的N-琥珀酰殼聚糖納米粒進(jìn)行了抗腫瘤作用研究，將制備的納米粒與H460細(xì)胞進(jìn)行48h，72h共孵育，隨后運(yùn)用MTT法，ELISA，細(xì)胞凋亡及實(shí)時(shí)定量熒光PCR對(duì)載siRNA的納米粒進(jìn)行了抗腫瘤作用測(cè)評(píng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，siRNA與N-琥珀酰殼聚糖納米粒結(jié)合后，降低了腫瘤細(xì)胞VEGFmRNA的表達(dá)量，具有良好的抗腫瘤作用，通過(guò)與