轉錄因子FOXC1和長鏈非編碼RNA FOXCUT在口腔鱗癌組織中的表達及功能研究.pdf

1、目的:初步研究叉頭框基因C1(Forkhead box C1,FOXC1)在口腔鱗狀細胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)組織中的表達及其在口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細胞中的功能;并進行與其鄰近長鏈非編碼RNA(long non code RNA,LncRNA)之間的相關性分析研究,該LncRNA是位于FOXC1上游啟動子臨近轉錄體(FOXC1 promoter upstream trans

2、cript,FOXCUT);初步研究LncRNA FOXCUT在OSCC組織中的表達及其在口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細胞中的功能;初步研究FOXC1siRNAs(small interfering RNA,siRNA)與FOXCUT siRNAs轉染Tca8113細胞后抑制裸鼠腫瘤生長情況。為探索口腔鱗癌發(fā)生機制、預后及治療提供新的線索及研究靶點。
　　方法:采用免疫組化技術(Immunohistochemistry,IH

3、C),蛋白印跡法(Western blot,WB)和實時定量聚合酶鏈反應法(QuantitativeReal time Polymerase Chain Reaction,Real TimePCR)檢測分析FOXC1在OSCC組織和臨近正常組織的表達水平;采用Real TimePCR方法檢測了FOXC1臨近LncRNAFOXCUT在OSCC組織內的表達情況,并采用皮爾森相關性分析研究了FOXC1與FOXCUT的相關關系;敲低FOXC1及

4、FOXCUT表達后建立siRNAs序列,Real TimePCR法篩選有效siRNA序列后轉染至Tca8113和SCC-9細胞,并采用甲基噻唑基四唑(MethylThiazolylTetrazolium,MTS)細胞生長檢測實驗,單細胞平板克隆實驗,劃痕實驗,CD133+亞群細胞成球實驗初步驗證FOXC1和FOXCUT在口腔鱗癌Tca8113細胞中的功能;建立FOXC1 siRNA和FOXCUT siRNA抑制Tca8113細胞增殖的B

5、ALB/c裸鼠荷瘤模型來驗證FOXC1和FOXCUT的功能。
　　結果:第一部分:1、OSCC腫瘤組織中FOXC1表達高于癌旁組織;2、下調FOXC1表達可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細胞增殖;3、下調FOXC1表達可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細胞侵襲;4、下調FOXC1基因表達可以降低OSCC干細胞功能;5、下調FOXC1基因表達可以降低OSCC干細胞樣腫瘤細胞功能。
　　第二部分:1、OSCC腫

6、瘤組織中FOXCUT表達高于臨近癌旁組織;2、下調FOXCUT表達可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細胞增殖;3、下調FOXCUT表達可以抑制口腔鱗癌Tca8113和SCC-9細胞侵襲;4、下調FOXCUT表達可以降低OSCC干細胞樣腫瘤細胞功能;
　　第三部分:1、FOXC1與FOXCUT在基因序列中位置相關;2、FOXC1與FOXCUT在OSCC腫瘤組織中表達相關;3、下調FOXCUT可以抑制FOXC1的表達;4、FO

7、XC1-LncRNA FOXCUT在OSCC發(fā)生機制中呈基因對形式發(fā)揮功能。5、FOXC1和FOXCUT表達下調后抑制VEGF-A,MMP2,MMP9和MMP7的表達。
　　第四部分:1、FOXCUT siRNA和FOXC1 siRNA轉染人舌鱗癌Tca8113細胞后,裸鼠體內實驗中腫瘤的生長受到抑制,2、FOXCUT和FOXC1 mRNA表達降低,FOXC1蛋白表達降低。
　　結論:1、FOXC1和FOXCUT在OSCC腫