fgl2凝血酶原酶在重癥急性胰腺炎大鼠胰腺的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)可引起一系列復(fù)雜的免疫反應(yīng)，影響疾病的發(fā)展及其預(yù)后。在此過程中，血液系統(tǒng)凝血功能也隨著胰腺炎癥反應(yīng)的發(fā)生而出現(xiàn)重大變化。fgl2(fibrinogen-like protein2/fibroleukin)，即纖維蛋白原樣2凝血酶原酶，是一種新近發(fā)現(xiàn)的凝血因子，能夠通過不依賴于經(jīng)典內(nèi)外源凝血途徑的獨(dú)立途徑直接產(chǎn)生纖維蛋白，從而在微血栓形成過程中具有重要作用。

2、本研究通過觀察在SAP大鼠胰腺及外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralblood mononuclear cell，PBMC)中fgl2凝血酶原酶的表達(dá)，并與假手術(shù)組(shamoperation，SO)大鼠比較，探討fgl2凝血酶原酶在SAP大鼠胰腺的作用及意義。
　　 方法:
　　 1.將48只體重約200-250 g的雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)平均分為SO組和SAP組，每組24只。采用經(jīng)胰管注射4％?；?/p>

3、膽酸鈉法誘發(fā)大鼠SAP模型，SO組僅開腹后翻動(dòng)腸管即關(guān)腹，術(shù)后每只大鼠均予2 mL/100g體重于背部皮下補(bǔ)充生理鹽水。
　　 2.造模成功后，各組于術(shù)后1h，4h和8h分批處死大鼠（各時(shí)點(diǎn)8只）。于大鼠下腔靜脈抽取5 mL靜脈血，其中4 mL以2500×g分離血清置于-20℃保存?zhèn)溆?余1 mL采用密度梯度離心法分離PBMC，置-80℃保存?zhèn)溆?。留取新鮮胰腺組織，一部分固定于4％多聚甲醛液中，待行組織病理學(xué)檢查;余胰腺置凍存管

4、中于-80℃保存，待行real-time PCR檢測(cè)。
　　 3.全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清淀粉酶(amylase，AMY)含量。
　　 4.常規(guī)蘇木素-伊紅染色觀察大鼠胰腺病理變化，并行胰腺病理學(xué)評(píng)分;Masson染色觀察大鼠胰腺微血栓形成，隨機(jī)計(jì)數(shù)微血管中微血栓形成的陽性血管率。采用real-time PCR、免疫組織化學(xué)法、免疫印跡法測(cè)定fgl2凝血酶原酶在大鼠胰腺及PBMC中的表達(dá)。
　　 5.采用SPSS

5、15.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)以(x)±SD表示，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析，采用單因素方差分析進(jìn)行組間、組內(nèi)差異性檢驗(yàn)。兩連續(xù)變量關(guān)聯(lián)強(qiáng)度使用Pearson相關(guān)系數(shù)(r)表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:成功誘發(fā)大鼠SAP模型。
　　 1.血清淀粉酶:SAP組血清淀粉酶較SO組在各時(shí)點(diǎn)均顯著升高(各時(shí)點(diǎn)P＜0.01)，模型誘發(fā)成功。SO組各時(shí)點(diǎn)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

6、>　　 2.胰腺形態(tài)學(xué)觀察:SO組各時(shí)點(diǎn)胰腺組織形態(tài)未見異常，胰腺小葉清晰;同SO組相比，SAP組胰腺組織均顯示具有不同程度的病理損害。Masson染色陽性血管率在SAP組中的各時(shí)點(diǎn)顯著高于正常組(P＜0.01)且隨時(shí)間延長(zhǎng)具有增加的趨勢(shì)(P＜0.01)。
　　 3.fgl2 mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá):SAP組大鼠胰腺及PBMC的fgl2 mRNA和胰腺fgl2蛋白質(zhì)表達(dá)相比SO組均明顯升高（P＜0.05），且隨病程延長(zhǎng)逐漸增多

7、(P＜0.01)。免疫組化染色顯示fgl2凝血酶原酶主要表達(dá)在SAP組大鼠胰腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞中。
　　 4.fgl2凝血酶原酶表達(dá)與陽性血管率及胰腺病理評(píng)分相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)分析顯示胰腺fgl2凝血酶原酶表達(dá)與陽性血管率存在顯著相關(guān)(r=0.842,P＜0.01);胰腺（r=0.852,P＜0.01）及PBMC(r=0.735,P＜0.01)內(nèi)fgl2表達(dá)與胰腺病理評(píng)分存在顯著相關(guān)。
　　 結(jié)論:fgl2凝血