農(nóng)桿菌介導的BcBCP1基因轉化馬鈴薯抗旱性研究.pdf

1、本研究以馬鈴薯品種黃麻子的脫毒微型薯為外植體，利用農(nóng)桿菌介導法將抗旱基因BcBCP1轉入馬鈴薯中，經(jīng)PCR和Southernblot檢測證明BcBCP1基因已轉入馬鈴薯基因組中。試驗建立了高效的馬鈴薯再生體系和遺傳轉化體系。對影響遺傳轉化因素激素種類與濃度、脫菌抗生素種類與濃度、共培養(yǎng)時間、篩選方式等進行了研究，通過對抗性植株相對含水量、葉綠素含量，脯氨酸含量測定，初步驗證轉基因馬鈴薯植株對水分脅迫的抗性比對照有明顯提高。主要研究結果如

2、下： 1.薯塊再生培養(yǎng)基確定為MS+ZT4mg/L+IAA1mg/L，出芽率為86％。 2.當農(nóng)桿菌菌液濃度為OD600=0.5，侵染時間為5min時，黃麻子的出芽率最高達87.19％，此時污染率較低僅為1.2％。 3.共培養(yǎng)時間對愈傷組織誘導率影響很大，黃麻子薯塊以共培養(yǎng)2d時轉化效果最好，薯塊出芽率達到了83.97％，且污染率僅為6.77％。 4.對不同產(chǎn)地脫菌抗生素的濃度進行了比較試驗，國產(chǎn)頭孢噻肟

3、鈉對BcBCP1基因的有效抑菌濃度是400mg/L，進口頭孢噻肟鈉對BcBCP1基因的有效抑菌濃度為150mg/L，且在有效的抑菌濃度下對外值體無不良影響。 5.試驗采用的抗性選擇劑為草丁膦(PPT)，篩選方式為延遲7d篩選，結果表明薯塊芽誘導階段PPT濃度為4mg/L，生根階段的PPT濃度為5mg/L。 6.目的基因BcBCP1試驗共獲得72株PPT抗性植株，其中35株通過了生根篩選(PPT5mg/L)，PCR檢測結果

4、表明有14株呈陽性，進一步的Southernblot雜交檢測中有6株檢測有雜交信號，說明基因已經(jīng)整合劍馬鈴薯基因組中，外源基因主要是單拷貝插入。 7.對雜交呈陽性的轉基因植株進行了生物學的檢測，將6個黃麻子轉基因植株及非轉基因對照進行干旱脅迫處理，分析轉基因植株和對照的生理指標變化情況，結果表明：在干旱脅迫處理15d后，6個黃麻子轉基因植株的相對含水量與對照相比差異明顯，對照植株輔氨酸含量提高了80.20％，而轉基因植株葉片脯氨