GPI-PLD基因與酶蛋白質結構的生物信息學分析.pdf

1、利用生物信息學技術，系統(tǒng)研究不同生物的GPI-PLD基因及其表達產物cDNA和蛋白質的分布特點，重點分析人的基因及其酶蛋白的結構。
　　搜索基因和蛋白質數(shù)據(jù)庫如IntEnz，Swiss-Prot ExPASy等，結合檢索相關論文數(shù)據(jù)庫如 MEDLINE，PROSITE Database等，獲得GPI-PLD(PLD1)的數(shù)據(jù)資料，利用網絡和研究基因與蛋白質的相關軟件，如BLAST、MEGA5、ClustalX、PAUP、PHYLI

2、P等軟件，比對不同生物GPI-PLD基因的DNA序列、cDNA序列和蛋白質序列，分析GPI-PLD基因的結構特點，酶蛋白質的結構特點，同源進化樹等方面的內容。
　　1.30余種生物存在GPI-PLD基因，它們都為脊椎動物，人和猩猩該基因均定位在第6號染色體，人基因組GPI-PLD基因全長70791bp，包括25個外顯子，24個內含子。細菌沒有該基因。
　　2.分析18種（重點分析7種）生物的GPI-PLD DNA序列，發(fā)現(xiàn)人

3、與黑猩猩的同源性最高，人與雞的同源性最低。人GPI-PLD基因編碼區(qū)的堿基變異以單核苷酸多態(tài)性(SNPs)最常見。變異的類型主要涉及同義突變和錯義突變。
　　3.20余種生物表達GPI-PLDmRNA(cDNA)或酶蛋白。涉及到骨髓、胰腺等器官，以及RAW-264.7、SW-742等細胞株。亞細胞器包括細胞質膜、高爾基體和分泌囊泡等。人GPI-PLD cDNA全長約2800 bp，人骨髓、胰腺和肝克隆的cDNA同源性超過95％。<

4、br>　　4.不同生物根據(jù)其基因推測的或經實驗證實的GPI-PLD酶分子均為一條多肽鏈，其長短各不相同，同源進化樹分析表明，人與海象進化更近，而與白頰長臂猿的進化最遠。
　　5.分析GPI-PLD酶分子，發(fā)現(xiàn)它既是糖蛋白也可被磷酸化修飾。酶分子中存在7個重復肽段，三個鈣結合位點，8個糖基化位點，還有鋅結合位點。
　　6.分泌性GPI-PLD在測定其酶活性時必須加離子去垢劑，其最適pH為pH5-pH8。蘇拉明、離子去垢劑等是該