eIF4E在急性髓細胞白血病中的表達研究.pdf

1、目的:
　　1、通過RT-PCR法檢測急性髓細胞白血病(AML)與非腫瘤對照者骨髓標本eIF4E的表達情況，比較eIF4E在AML與非腫瘤對照組之間的表達差異。
　　2、檢測AML誘導治療前后eIF4E表達情況，觀察誘導治療前后eIF4E表達差異。
　　3、計算M4、M5型AML與其他亞型AML eIF4E表達情況，進一步比較不同亞型AML之間eIF4E表達的差異。
　　4、統(tǒng)計AML基因突變的表達情況，分析eI

2、F4E表達與AML其他分子生物學異常的相互關(guān)系。
　　方法:
　　1、標本采集:采集初診AML、誘導治療達完全緩解AML及非腫瘤對照者骨髓標本，提取單個核細胞，加入TRIzol試劑充分裂解細胞，-80℃冷凍保存。AML診斷及療效標準符合張之南《血液病診斷及療效標準》。非腫瘤對照者納入疾病包括免疫性血小板減少癥、良性疾病導致的缺鐵性貧血。
　　2、實驗分組:將初診AML設(shè)為實驗組，非腫瘤對照者設(shè)為對照組。將實驗組能夠耐受

3、并同意化療者進行常規(guī)誘導化療，其中，非M3型AML化療方案為DA(柔紅霉素45-60mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d)或IDA（去甲氧柔紅霉素8-12mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d）標準誘導方案;M3型AML化療方案為維甲酸+三氧化二砷（維甲酸20mg/m2/d口服至完全緩解、三氧化二砷0.16mg/kg/d靜脈注射至完全緩解）雙誘導方案，并根據(jù)個體情況加用蒽環(huán)類藥物化療

4、。
　　3、檢測方法:根據(jù)人eIF4E基因mRNA序列設(shè)計引物(NM_001130679)，eIF4E上游引物:5'-ACGGAATCTA ATCAGGAGGT-3'，下游引物:5'-TTCCCACATAGG CTCAATAC-3'，擴增片段長度為246bp。根據(jù)人β-actin基因mRNA序列設(shè)計引物(BC_002409)，β-actin上游引物:5'-CTGGGACGACATGGAGAAA A-3'，下游引物:5'-AAGGA

5、AGGCTGGAAGAGTGC-3'，擴增片段長度為564bp。使用淋巴細胞分離液提取單個核細胞，使用TRIzol試劑等抽提RNA，并用AMV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄，在聚合酶鏈式反應(yīng)體系中分別加入β-actin、eIF4E引物進行聚合酶鏈式反應(yīng)，使用瓊脂糖凝膠電泳鑒定β-actin、eIF4E的表達。
　　4、統(tǒng)計分析:根據(jù)所得實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，定量資料兩組間比較采用t檢驗，定性資料兩組間比較采用卡方檢驗，定性資料關(guān)聯(lián)性分析采

6、用卡方檢驗。
　　結(jié)果:
　　1、本實驗通過RT-PCR法檢測AML骨髓標本eIF4E表達情況，測得55例初診AML中36例eIF4E陽性表達，eIF4E陽性率為65.5％，經(jīng)誘導治療達完全緩解后3例AML骨髓細胞eIF4E由陽性轉(zhuǎn)為陰性，非腫瘤對照者eIF4E全部陰性。
　　2、18例M4、M5型AML中15例eIF4E陽性表達，eIF4E陽性率為83.3％，37例其他亞型AML中21例eIF4E陽性表達，eIF4E

7、陽性率為56.8％，統(tǒng)計學分析提示M4、M5型AML與其他亞型AMLeIF4E表達無差異(P＞0.05)。
　　3、55例初診AML中，4例FLT3/ITD基因突變陽性表達，統(tǒng)計學分析提示eIF4E表達與FLT3/ITD基因突變表達無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、部分初診AML eIF4E高表達，誘導治療達完全緩解后少部分AML骨髓細胞eIF4E表達水平下降。eIF4E表達水平有可能作為AML控制情況的