人精子頭部蛋白質(zhì)圖譜的初步建立及針頭畸形精子特異性表達蛋白質(zhì)的篩選.pdf

1、目的:建立人類精子頭部和尾部蛋白質(zhì)圖譜,篩選針頭畸形精子癥特異性表達蛋白質(zhì).方法:采用固相pH梯度(IPG)等電聚焦為第一向,SDS-PAGE垂直電泳為第二向?qū)θ印⒕宇^部、針頭號畸形精子蛋白質(zhì)抽提物進行蛋白質(zhì)雙向電泳(2-DE)分離,經(jīng)銀染獲得蛋白質(zhì)電泳圖像.其中精子蛋白質(zhì)的2-DE比較了硫脲/尿素/鹽酸胍法和Kit/鹽酸胍法兩種蛋白質(zhì)提取方法.采用分析軟件Image Master 2D Elite 3.0對2-DE圖像分析,著重

2、比較精子蛋白質(zhì)頭部圖像與精子蛋白質(zhì)圖像、針頭畸形精子蛋白質(zhì)圖像與精子蛋白質(zhì)圖像的蛋白質(zhì)斑點組成差異.結(jié)果:(1)硫脲/尿素/鹽酸胍法和Kit/鹽酸胍法兩種蛋白質(zhì)提取方法所得2-DE圖像中,硫脲/尿素/鹽酸胍法得到的蛋白質(zhì)斑點有802個,Kit/鹽酸胍法得到2-DE圖像中的蛋白質(zhì)斑點797個,其中相同的有492個,將兩種方法獲得的圖像整合而得到的全精子蛋白質(zhì)質(zhì)圖像有1107個蛋白質(zhì)斑點.(2)精子頭部圖像蛋白質(zhì)斑點有428個,經(jīng)過匹配,它

3、們?nèi)縼碓从谌拥鞍踪|(zhì)圖像.(3)針頭畸形精子圖像蛋白質(zhì)斑點有424個,將之與全精子蛋白質(zhì)圖像比較,發(fā)現(xiàn)有102個蛋白質(zhì)斑點在正常精子中無表達.結(jié)論:(1)102個在針頭畸形精子中表達但是在精子蛋白質(zhì)圖像中缺如的點很可能是與精子畸形有關(guān)的點,為進一步研究針頭號畸形精子畸形形成的機理提供了突破口.(2)成功分離出精子頭部,并通過蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)初步建立精子頭部蛋白質(zhì)圖像,有428個蛋白質(zhì)斑點,據(jù)此,確定了精子頭部主要來源的蛋白質(zhì).(3