MLL重排急性白血病的臨床和遺傳學特點研究及MLL白血病原代細胞異種移植小鼠模型的建立.pdf

1、本文內(nèi)容分為兩部分：
　　第一部分
　　目的:11q23/MLL急性白血病(11q23/MLL acute leukemia,11q23/MLL AL)是一種常見的細胞遺傳學異常。11q23/MLL AL的易位和重排涉及眾多的伙伴基因,應用傳統(tǒng)的細胞遺傳學分析(conventional cytogenetical assay, CCA)檢測所有的MLL重排會比較困難。為了提高11q23/MLL AL染色體畸變的檢測,我們聯(lián)合

2、應用多重巢式 RT-PCR分析染色體畸變的方法。最近已發(fā)現(xiàn)大量的分子標記是急性白血病中潛在的預后因素。評估這些分子標記的相互關系和相對預后已變得尤為重要。我們在11q23/MLL AL中檢測了這些分子突變和免疫分型,這可能會為11q23/MLL AL提供良好的治療策略。
　　方法:采用多重巢式 RT-PCR聯(lián)合染色體核型分析對2009年至2011年間347例初治AL患者進行檢測。對檢測出11q23/MLL AL同時檢測 NPM1,

3、FLT3,CEBPα,c-kit, DNMT3A,IDH1和IDH2分子突變。對11q23/MLL AL患者采取標準的化療方案治療后,采用Cox比例風險模型評估 OS的獨立預后因素。
　　結(jié)果:347例 AL患者中,通過 CCA檢測出2例11q23/MLL AL,通過多重巢式 RT-PCR則檢測出28例11q23/MLL AL。在這28例11q23/MLL AL中有4例(14.28％,4/28)檢測出 FLT3突變;有1例(3.5

4、％,1/28)檢測出 DNMT3A突變;有1例(3.5％,1/28)檢測出 IDH2突變。在這28例11q23/MLL AL中未檢測出有 NPM1、CEBPα、c-kit和IDH1突變。多變量 Cox回歸分析未顯示出分子突變與11q23/MLL AL的預后相關。
　　結(jié)論:常規(guī)細胞遺傳學和分子遺傳學技術相輔相成有助于提高11q23/MLL AL的檢出率。11q23/MLL AL患者的細胞遺傳學和分子學研究結(jié)果為選取治療方法,尤其是

5、否選取造血干細胞移植提供了最佳治療策略。
　　第二部分
　　目的：本研究旨在利用混合譜系白血病(Mixed Lineage Leukemia, MLL)細胞在NOD/SCID免疫缺陷小鼠中建立人鼠嵌合的異種移植模型。
　　方法：選取 MLL/AF4重排的白血病患者的單個核細胞懸液通過尾靜脈注射的方式接種給 NOD/SCID小鼠。每周稱量體重,接種14天后經(jīng)流式細胞術(Flow cytometry, FC)檢測小鼠外周血

6、中CD45+細胞的百分比。當小鼠出現(xiàn)精神萎靡、乏力、蒼白、豎毛,或體重下降20％時,對其施行安樂死,解剖動物。取小鼠脾臟及肝臟行 HE染色,并通過流式細胞術檢測外周血、骨髓、脾臟和淋巴結(jié)細胞懸液中CD45+細胞的百分比。
　　結(jié)果：以對照組小鼠的單個核細胞做陰性設門,通過 FC監(jiān)測發(fā)現(xiàn)分別于接種35±4后,在病例的小鼠外周血中檢測到人 CD45+細胞,且其百分比隨時間延長而逐漸增高,最終達61.0％±3.5％;大體觀上發(fā)現(xiàn)小鼠脾臟