非瑟酮對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:研究非瑟酮(fisetin,Fis)在生理狀態(tài)下及氧化應(yīng)激狀態(tài)下對人晶狀體上皮細(xì)胞(human lens epithelial cells,HLECs)增殖和凋亡的影響。
　　 方法:(1)實驗準(zhǔn)備:將凍存的人晶狀體上皮細(xì)胞株(SRA01／04)復(fù)蘇后,置于含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基(葡萄糖終濃度5.56mmol／L)中培養(yǎng),傳代,收集對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行以下實驗。(2)分組及干預(yù):用0.25％胰酶消化收集同一代貼

2、壁細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液計數(shù)后,隨機(jī)分為空白對照組(不加干預(yù))；Fis組(分別加入5μg／ml、10μg／ml、20μg／ml濃度的Fis)；H2O2組(加入300μmol／L過氧化氫(Hydrogen peroxide,H2O2))；Fis+H2O2組(先加入5μg／ml、10μg／ml、20μg／mlFis,1小時后加入300μmol／L H2O2共同培養(yǎng))。(3)形態(tài)學(xué)觀察:培養(yǎng)12h和24h后倒置顯微鏡觀察以上各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,

3、隨機(jī)照相(×100倍,×200倍),對比各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。(4)Fis對HLECs增殖的觀察:采用四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)比色法分別檢測Fis在有或無H2O2作用12小時和24小時后對HLECs增殖的影響。(5)Fis對H2O2誘導(dǎo)的HLECs凋亡的觀察:采用異硫氰酸(FITC-Annexin-v,Annexin-Ⅴ)和碘化丙錠(Propidium Iodide,PI)標(biāo)記的雙染

4、色免疫熒光法,流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometric analysis,FCM)檢測Fis在與H2O2共同作用24小時后HLECs凋亡率的變化。
　　 結(jié)果:(1)與空白對照組比較,加入5～20μg／mlFis培養(yǎng)12小時和24小時,對HLECs的增殖無明顯影響(P>0.05),細(xì)胞形態(tài)無明顯變化。(2)與空白對照組比較,H2O2組較多細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞密度降低以及典型的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,細(xì)胞增殖能力明顯降低,凋亡率明顯增加,差異有顯

5、著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。加入5～20μg／mlFis預(yù)處理組,H2O2誘導(dǎo)的典型形態(tài)改變的細(xì)胞減少,細(xì)胞增殖能力明顯改善,并且隨時間和Fis濃度的增加作用更明顯(P<0.05)；Fis作用24h時,細(xì)胞凋亡率逐漸降低,與H2O2組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),并且隨Fis濃度增加作用更明顯(P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)在生理條件下,在一定濃度和作用時間范圍內(nèi),非瑟酮對HLECs的增殖無明顯影響。(2)在氧