胰島新生相關蛋白在畢赤酵母及大腸桿菌中的克隆、表達及功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:胰島新生相關蛋白(islet neogensis associat protein,INGAP)是一種與胰島再生有關的蛋白質,可以促進胰腺導管上皮細胞向胰島的轉化,從而使胰島再生.該實驗研究旨在探討INGAP在畢赤酵母和大腸桿菌中表達,來獲得可以具有實際應用價值的INGAP,為進一步驗證它在糖尿病動物模型以及臨床實驗及臨床應用打下基礎.方法:首先將INGAP基因,插入到含有AOX1啟動子和α-factor信號肽序列的表達載體pPI

2、C9K中.采用畢赤酵母表達系統(tǒng)對其進行的高效的分泌表達,采用G41 8篩選轉化子,甲醇誘導酵母表達后,重組蛋白質分泌表達到發(fā)酵液上清中,表達產物經上SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換樹脂柱并平衡后進行電梯度洗脫,收集目的峰后用G25純化后真空冷凍收集目的蛋白.同時在大腸桿菌進行了表達,將合成的基因插入到融合表達載體PGEX-4T-1中26KD的谷胱甘肽-S-轉移酶基因的下游,并以融合蛋白的形式在大腸桿菌BL21中表達

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