普萘洛爾誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡對P38MAPK信號通路影響的體外實驗研究.pdf

1、目的:血管瘤是嬰幼兒常見的良性腫瘤，盡管其屬于良性腫瘤，并且85％-90％可以自行消退，但仍有一些可能影響組織器官功能及外觀，甚至危及生命，需要及時治療。近年來口服普萘洛爾成為治療嬰幼兒血管瘤的一種新方法，這種方法療效確切，患兒有較好的耐受。普萘洛爾可以治療血管瘤是偶然發(fā)現(xiàn)的[1]，對于藥物作用機(jī)制，我們知之甚少。p38絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated proteinkinase MAPK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與細(xì)胞周期

2、、細(xì)胞基因表達(dá)以及細(xì)胞分化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等過程。目前研究證實P38MAPK參與血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過程并占有重要位置。本實驗為探究在普萘洛爾誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過程中，對P38MAPK信號通路的影響，以進(jìn)一步明確普萘洛爾治療血管瘤的分子機(jī)制。
　　方法:本實驗以臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)細(xì)胞株為研究對象，細(xì)胞傳代至第三代至第五代備用。普萘洛爾、平陽霉素以不

3、同的藥物濃度作用于HUVEC，倒置顯微鏡下觀察藥物作用前后，細(xì)胞形態(tài)變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度下普萘洛爾、平陽霉素誘導(dǎo)HUVEC凋亡率;蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot，WB)檢測兩種藥物作用下，HUVEC中P38MAPK及P-P38MAPK蛋白質(zhì)的表達(dá)。以上原始數(shù)據(jù)均使用SPSS19.0軟件分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，兩樣本均數(shù)比較使用獨立樣本t檢驗，多個樣本兩兩比較先使用單因素方差分析(ANOVA)，然后使用

4、多樣本兩兩比較中的SNK法進(jìn)行比較，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、普萘洛爾、平陽霉素分別以藥物濃度0ug/ml，32ug/ml，64ug/ml，128ug/ml，256ug/ml，作用于HUVEC24h后，倒置顯微鏡下觀察，HUVEC形態(tài)發(fā)生改變，核分裂相增多，凋亡細(xì)胞增多，根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果及統(tǒng)計分析，隨著藥物濃度的增大，HUVEC凋亡率逐漸增大，差距具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。普萘洛爾、平陽霉素以

5、同樣藥物濃度及時間作用于HUVEC，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，在64ug/ml，128ug/ml，256ug/ml藥物濃度作用點，平陽霉素誘導(dǎo)HUVEC凋亡的作用較普萘洛爾強(qiáng)。2、普萘洛爾、平陽霉素分別作用于HUVEC時間1h、2h，分為四個組，每組藥物濃度依次為:0ug/ml，32ug/ml，64ug/ml，128ug/ml，256ug/ml，四個組中P38MAPK灰度值與GAPDH比較，各組內(nèi)細(xì)胞蛋白表達(dá)比值無明顯差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(

6、P＞0.05); p-P38MAPK蛋白表達(dá)灰度值與GAPDH比較，各組內(nèi)細(xì)胞蛋白表達(dá)比值差異明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。當(dāng)普萘洛爾作用于HUVEC時間為1h時，p-P38MAPK的表達(dá)量較作用時間為2h多，同樣平陽霉素作用于HUVEC時間為1h時，p-P38MAPK的表達(dá)量較作用時間為2h多;當(dāng)作用時間為1h時，普萘洛爾作用于HUVEC，p-P38MAPK的表達(dá)量較平陽霉素多，作用時間為2h時，效果亦相同。
　　結(jié)論

7、:普萘洛爾作用于HUVEC后，表現(xiàn)出誘導(dǎo)凋亡作用，并且呈濃度依賴性，同時P38MAPK、p-P38MAPK均有表達(dá)，并且p-P38MAPK隨藥物濃度的增加，表達(dá)量依次增加。結(jié)果表明:普萘洛爾具有誘導(dǎo)HUVEC凋亡的作用，同時P38MAPK信號通路被激活，參與凋亡過程。實驗結(jié)果顯示，當(dāng)作用于HUVEC的時間相同時，普萘洛爾對P38MAPK信號通路的影響較平陽霉素大;當(dāng)作用于HUVEC的藥物相同時，作用時間越短，對P38MAPK信號通路的影