蝦類蛋白質(zhì)的雙向電泳研究.pdf

1、以數(shù)量增長(zhǎng)為主的規(guī)?；B(yǎng)殖使蝦肉的食用品質(zhì)大幅下降，尋找一種有效的蝦肉品質(zhì)評(píng)價(jià)及等級(jí)標(biāo)注方法、以及對(duì)蝦肉品質(zhì)形成機(jī)理和養(yǎng)殖品質(zhì)控制研究已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。迄今為止，對(duì)生鮮蝦肉品質(zhì)評(píng)價(jià)研究主要集中于營(yíng)養(yǎng)成分分析、風(fēng)味物質(zhì)檢測(cè)、過(guò)敏原檢測(cè)等方面，而對(duì)優(yōu)質(zhì)蝦肉生鮮品質(zhì)的形成機(jī)理、控制和評(píng)價(jià)尚缺乏有效的方法。雙向凝膠電泳技術(shù)具有高通量、高分辨率的特點(diǎn)，為生鮮蝦肉品質(zhì)及形成機(jī)理研究提供了新的思路。借助雙向電泳技術(shù)對(duì)不同品種蝦肉進(jìn)行差異分析，尋

2、找與其食用品質(zhì)相關(guān)的標(biāo)記蛋白，對(duì)蝦類養(yǎng)殖以及蝦肉品質(zhì)的控制、評(píng)價(jià)及等級(jí)標(biāo)注等具有重要意義。
　　 本研究通過(guò)對(duì)蝦肉蛋白樣品制備和雙向電泳條件等相關(guān)技術(shù)參數(shù)進(jìn)行比較和優(yōu)化，建立了蝦肉蛋白質(zhì)的雙向電泳方法，并以目前國(guó)內(nèi)普遍養(yǎng)殖的南美白對(duì)蝦、刀額新對(duì)蝦、羅氏沼蝦和青蝦為研究對(duì)象，建立四種不同品種生鮮蝦肉2-DE圖譜，并進(jìn)行差異分析。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1、通過(guò)對(duì)蝦肉取樣部位、樣品裂解液的組成的比較研究和優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)從蝦肉第

3、三腹節(jié)內(nèi)部取樣，用液氮進(jìn)行研磨后，加入8M尿素，4％CHAPS,40mMTris,0.5％CarrierAmpholyte,1％TBP裂解液能有效提高蛋白的抽提率，蛋白抽提率達(dá)(166.68±2.36)μg/mg;Clean up試劑盒能進(jìn)一步純化蛋白，去除雜質(zhì)，使2-DE圖譜背景更加清晰，具有較高的分辨率和良好的重復(fù)性。
　　 2、通過(guò)對(duì)水化方式、等電聚焦參數(shù)、SDS-PAGE凝膠濃度、IPG膠條以及蛋白上樣量的比較研究和優(yōu)化

4、，建立了蝦肉蛋白雙向電泳的方法。結(jié)果表明，采用被動(dòng)水化、同時(shí)延長(zhǎng)水化時(shí)間，漸進(jìn)式升壓的方式能獲得較好的等電聚焦效果；選擇pH4-7，24cm IPG膠條進(jìn)行等電聚焦，蛋白上樣量是220μg，上樣體積是450μL，并用12％SDS-PAGE凝膠進(jìn)行第二向蛋白質(zhì)分離，可得到具有較高的分離度和分辨率的2-DE圖譜，重復(fù)樣品匹配率達(dá)75％以上，具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
　　 3、取相同蛋白濃度的南美白對(duì)蝦、刀額新對(duì)蝦、羅氐沼蝦和青蝦的