兔上肢骨折愈合的蛋白質組學雙向電泳分析.pdf

1、目的：利用雙向電泳技術，獲得兔骨折愈合不同時期(2w，4w，8w，12w)的骨痂蛋白和正常骨組織的蛋白質雙向電泳圖譜，動態(tài)的觀察骨痂組織中蛋白質含量、種類與正常骨組織的差異，找出表達差異的蛋白質點，為后續(xù)進行質譜分析，鑒定出參與骨折愈合過程的特異性蛋白質奠定基礎。
　　 方法：選擇新西蘭大白兔40只，體重2-2.2kg，隨機分成4組，每組10只。建立兔橈骨的骨折模型，分別于2w、4w、8w、12w處死動物，截取骨痂組織及對側正常

2、骨組織。使用蛋白質裂解液，以正常骨組織為對照組，2w、4w、8w、12w的骨痂蛋白為實驗組，分別提取各組骨組織的總蛋白，檢測各組蛋白提取液的濃度，用SDS-PAGE凝膠電泳初步觀察，雙向凝膠電泳分離蛋白質和考馬斯亮藍染色后掃描獲取高清晰的蛋白質圖譜，再經(jīng)計算機軟件對比分析，得到表達差異的蛋白質點。
　　 結果：各實驗組和對照組的雙向凝膠電泳圖譜分辨率高，重復性好。骨折愈合不同時期獲得的蛋白質點個數(shù)：2周(843+29)，4周(7

3、27±36)，8周(785±30)，12周(737±42)，對照組蛋白點數(shù)為(710±25)。以對照組的雙向電泳圖譜為比較對象，實驗組匹配蛋白點相對含量的比值大于2或者小于0.5則認為是差異蛋白質點，從而得出蛋白質差異點數(shù)目是：22(2周)，26(4周)，24(8周)，21(12周)。
　　 結論：本研究建立了分辨率高，且重復性好的兔骨折愈合蛋白質組學雙向凝膠電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)了許多在骨折愈合過程中與對照組相比表達差異的蛋白質。為進