雙-（對(duì)-丙烯酰苯氧乙酸衍生物）類GSTM選擇性二價(jià)潛抑制劑的設(shè)計(jì)、合成和表征.pdf

1、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione-S-transferase,GSTs，EC2.5.1.18)是一種重要的二相生物轉(zhuǎn)化代謝酶，可催化GSH(glutathionin)與內(nèi)外源性小分子物質(zhì)的親電結(jié)合反應(yīng)生成水溶性增加的GSH加合物而易于物代謝，從而保護(hù)正常細(xì)胞功能。胞液中有多種GST同工酶如GSTP、GS TA、GSTM等。研究表明，人體許多實(shí)體瘤的化療耐藥與細(xì)胞中GSTP的高表達(dá)密切相關(guān)；而GSTM被誘導(dǎo)表達(dá)與卵巢癌和兒童急

2、性淋巴癌等的不良預(yù)后相關(guān)，針對(duì)GSTM的選擇性抑制劑可作為腫瘤化療增敏劑。
　　依他尼酸(EA)作為一個(gè)經(jīng)典的GST單價(jià)抑制劑，其對(duì)GST的抑制作用較弱且同工酶選擇性不夠理想。EA的副作用也使其臨床使用受到限制。本文基于課題組前期雙依他尼酸類GST二價(jià)潛抑制劑的研究，為減小依他尼酸對(duì)正常細(xì)胞的毒性，設(shè)計(jì)合成新型對(duì)-烷氧基苯丙烯酮類GSTM選擇性二價(jià)潛抑制劑：
　　首先，選擇芳香環(huán)不含鹵素取代的對(duì)-烷氧基苯丙烯酮衍生物為底物結(jié)

3、合單元，以減小依他尼酸中二氯苯結(jié)構(gòu)潛在的毒性；再基于 GST同工酶二聚體的活性中心距離及縫隙結(jié)構(gòu)差異，針對(duì)其二聚體的對(duì)稱雙活性中心，設(shè)計(jì)不同長(zhǎng)度柔性臂鏈接雙-對(duì)-烷氧基苯丙烯酮構(gòu)成雙價(jià)底物型抑制劑，即二價(jià)潛抑制劑。通過(guò)Molegro Virtual Docker4.1.0軟件對(duì)所設(shè)計(jì)的化合物的GSH產(chǎn)物進(jìn)行了計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接初步篩選。
　　優(yōu)化合成路線，首先合成該類對(duì)丙烯?；窖跻宜嵫苌锕δ軉卧?；再以不同長(zhǎng)度二醇、二胺、醇胺為連結(jié)

4、臂，制備對(duì)應(yīng)二價(jià)潛抑制劑。所合成的一系列化合物均未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、1D-NOESY、13C-NMR和FTMS確定。
　　制備GSTA、GSTP、GSTM和血吸蟲GST(SjGST)，表征化合物酶抑制活性和同工酶選擇性：首先通過(guò)光度法表征GSH加合物生成；酶初速度表征抑制劑的抑制能力；熒光滴定法表征二價(jià)抑制劑；測(cè)定抑制劑半抑制濃度并擬合活性響應(yīng)曲線獲得抑制常數(shù)。結(jié)果顯示，該類新設(shè)計(jì)化合物為 GSTM選擇性二價(jià)潛抑制

5、劑；其中 BDMAA和BDMAA-Cl原位生成對(duì)應(yīng)產(chǎn)物型對(duì)GSTM的抑制常數(shù)小于10nM，為GSTA和GSTP的2％以下，其對(duì)GSTM的選擇性抑制能力與雙依他尼酰胺相當(dāng)。
　　比較化合物活性結(jié)構(gòu)關(guān)系表明，α,β-不飽和酮的碳碳雙鍵結(jié)構(gòu)是GSTM潛抑制劑的重要官能團(tuán)；芳香環(huán)上的2,3位同時(shí)被取代，其對(duì)GSTM的抑制活性顯著增加；以線性短鏈二胺、二醇和醇胺連接，合成得到對(duì)稱的二價(jià)GST抑制劑對(duì)GSTM的抑制作用顯著強(qiáng)于單價(jià)抑制劑。當(dāng)選