產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株的篩選、鑒定及其抑制玉米秸稈霉變研究.pdf

1、我國(guó)玉米秸稈在逐步實(shí)現(xiàn)機(jī)械化打捆收儲(chǔ)后，因收獲時(shí)天氣多變，水分含量高，混入泥土等原因，秸稈捆內(nèi)極易滋生霉菌，造成玉米秸稈資源浪費(fèi)，且對(duì)奶牛等反芻動(dòng)物健康構(gòu)成極大威脅。目前常用的丙酸、丙酸鹽、氧化鈣等化學(xué)防霉劑因添加量大、成本高、對(duì)工作人員和加工設(shè)備具有損傷作用，使其在玉米秸稈這一廉價(jià)資源的應(yīng)用上受到限制。本試驗(yàn)以產(chǎn)幾丁質(zhì)酶枯草芽孢桿菌BS-1、產(chǎn)酸植物乳桿菌LABP以及玉米秸稈中優(yōu)勢(shì)霉菌為研究對(duì)象，探究BS-1和LABP對(duì)玉米秸稈中霉菌

2、的抑制作用，為提高秸稈利用率，提供理論依據(jù)。
　　本試驗(yàn)利用膠體幾丁質(zhì)培養(yǎng)基從玉米秸稈中篩選出一株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株BS-1，同時(shí)將秸稈中的優(yōu)勢(shì)霉菌進(jìn)行分離、純化;通過(guò)對(duì)BS-1菌株和優(yōu)勢(shì)霉菌形態(tài)學(xué)觀察以及16S rDNA或18S rDNA序列測(cè)定進(jìn)行菌種鑒定;利用3，5-二硝基水楊酸(DNS)比色法測(cè)定BS-1菌株發(fā)酵24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h的幾丁質(zhì)酶活力;利用牛津杯瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)BS-1菌株發(fā)酵

3、液對(duì)玉米秸稈中優(yōu)勢(shì)霉菌的抑制作用;于玉米秸稈培養(yǎng)基中接種BS-1、LABP及其復(fù)合菌劑，驗(yàn)證三組菌株對(duì)玉米秸稈的利用情況;采用析因設(shè)計(jì)，玉米秸稈含水量依次為15％、20％、25％，分別添加BS-1、LABP及其復(fù)合菌株處理，以0.5％丙酸為陽(yáng)性對(duì)照，無(wú)處理為空白對(duì)照，共15個(gè)處理組，密閉真空保存30d后開(kāi)封進(jìn)行有氧存放，分別于密封前、有氧存放0d、5d、10d、15d取樣測(cè)定常規(guī)養(yǎng)分含量變化、有氧穩(wěn)定時(shí)間、霉菌數(shù)量以驗(yàn)證抑菌效果。得到的

4、主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)玉米秸稈中分離出產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株BS-1經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）;4株優(yōu)勢(shì)霉菌經(jīng)鑒定分別為卷枝毛霉（Mucor circinelloides）、尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysporum）、米曲霉（Aspergillus oryzae）、黑曲霉（Aspergillus niger）。
　　(2)BS-1菌株在37℃下培養(yǎng)120h產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活力達(dá)到最高值3.23

5、U/mL。
　　(3)BS-1菌株發(fā)酵液對(duì)4株優(yōu)勢(shì)霉菌均有明顯抑制作用，抑菌圈直徑分別為18.13mm、18.48mm、17.55mm、15.68mm。
　　(4)玉米秸稈霉變初期（15d以內(nèi)）DM、淀粉含量顯著下降（P＜0.05），而CP、NDF含量呈上升趨勢(shì)，對(duì)ADF則無(wú)顯著影響(P＞0.05)，且隨著霉變程度加重，各營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)變化幅度增加，以淀粉相對(duì)損失率最高。
　　(5)當(dāng)玉米秸稈含水量為20％時(shí)，BS-1和LA

6、BP復(fù)合菌劑處理后，秸稈的有氧穩(wěn)定時(shí)間低于丙酸處理，差異不顯著(P＞0.05)，但顯著長(zhǎng)于空白對(duì)照(P＜0.05);而當(dāng)玉米秸稈含水量為25％時(shí)，試驗(yàn)組和對(duì)照組均發(fā)生了嚴(yán)重霉變，產(chǎn)生明顯的肉眼可見(jiàn)的霉菌斑點(diǎn)。
　　(6)當(dāng)玉米秸稈含水量為20％時(shí)，BS-1和LABP復(fù)合菌劑處理后，霉變最嚴(yán)重時(shí)，秸稈中霉菌總數(shù)在104cfu/g范圍內(nèi)，而空白對(duì)照達(dá)到了106cfu/g。而當(dāng)秸稈含水量為25％時(shí)，試驗(yàn)組和對(duì)照組霉菌總數(shù)均達(dá)到了106c