共振散射光譜法用于牛血清白蛋白的痕量檢測.pdf

1、共振散射光譜法用于牛血清白蛋白的痕量檢測重慶大學碩士學位論文(學術(shù)學位)學生姓名：周大學指導教師：宋仲容教授專業(yè)：化學學科門類：理學重慶大學化學與化學工程學院二O一二年四月重慶大學碩士學位論文中文摘要摘要蛋白質(zhì)是細胞的重要組成物，在生命現(xiàn)象和生命過程中起著至關(guān)重要的作用。對蛋白質(zhì)的定量分析檢測在藥學、生物化學、生物技術(shù)、臨床醫(yī)學及食品營養(yǎng)學領(lǐng)域有著十分重要的現(xiàn)實意義，其研究成果對解釋蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及蛋白質(zhì)與物質(zhì)或藥物的作用機理具

2、有指導意義。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)分析檢測方法主要有凱式定氮法、考馬斯亮藍法、分光光度法、熒光光度法、化學發(fā)光法、近紅外反射光譜法、雙縮脲法等。但這些分析方法大都存在靈敏度較低、選擇性差、穩(wěn)定性弱及操作繁瑣費時等局限。共振散射光譜法作為新興的光譜分析技術(shù)，因其靈敏度高、選擇性好、操作簡便等優(yōu)點而得到廣泛應用，本文研究了共振散射光譜法用于痕量蛋白質(zhì)的檢測，論文主要研究內(nèi)容包括：①酸性鉻蘭K牛血清蛋白OP體系的共振散射、二級散射和倍頻散射光譜研究在P

3、H32的鄰苯二甲酸氫鉀鹽酸緩沖液中，酸性格蘭K可離解而以帶負電荷的陰離子存在，而在此條件下牛血清蛋白質(zhì)(BSA)處于其等電點(PI)之下，則以帶多個正電荷的陽離子形式存在，兩者可借助靜電引力、氫鍵作用及疏水作用力而結(jié)合形成締合物微粒。當溶液中存在非離子表面活性劑OP時，OP可與締合微粒通過分子間作用力產(chǎn)生吸附結(jié)合，增大微粒粒徑。此時將引起體系共振散射(RLS)、二級散射(SOS)和倍頻散射(FDS)的顯著增強，其最大RLS，SOS，F(xiàn)D

4、S波長分別位于420nm、680nm和340rim。三種散射增強(刖也Msos和AIFDs)在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)濃度成正比，方法線性范圍分別是RLS為064mg／L、SOS為O58mg／L：FDS為0—58mg／L；檢出限分別為1233ttg／L(aLS)、112199／L(SOS)、1149ttg／L(FDS)，據(jù)此建立了靈敏的測定BSA的共振線性(RLS)和共振非線性光散射(RNLS)分析法。研究了反應體系的RLS、SOS和FDS光

5、譜特征，并以RLS法考察了體系介質(zhì)條件選擇、PH值、共振探針用量、非離子表面活性劑OP濃度及共存物質(zhì)等因素對散射體系的影響。結(jié)果表明方法選擇性好，靈敏度高，操作簡便，可用于血清、卵清和尿樣中蛋白質(zhì)的測定，回收率為9944％10395％。②甲苯咪唑共振散射法用于蛋白質(zhì)的痕量檢測建立血液中痕量蛋白的共振散射(RLS)光譜分析方法。鹽酸一甲苯咪唑(MEB)牛血清白蛋白(BSA)體系的最大共振散射(RLS)，二級散射(sos)，倍頻散射(FDS