幾種藥物小分子與牛血清白蛋白相互作用的光譜法研究.pdf

1、論文主要對(duì)近年來(lái)小分了與血清白蛋白相互作用的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述，并分別研究了幾種藥物小分了與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。光譜法在小分子與生物大分子相互作用的研究領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛，但是光譜法結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)來(lái)探討小分子與血清白蛋白的結(jié)合作用的文章還比較少。本論文嘗試將化學(xué)計(jì)量學(xué)方法多元曲線分辨．交替最小二乘法用于解析實(shí)驗(yàn)得到的光譜數(shù)據(jù)，討論了方法的原理和實(shí)際應(yīng)用，并探討了化學(xué)計(jì)量學(xué)在復(fù)雜的生物化學(xué)體系中實(shí)現(xiàn)同時(shí)解析多組分平衡濃度和純

2、光譜的可行性。 第一部分：本節(jié)首先簡(jiǎn)要介紹了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能和性質(zhì)，然后依次對(duì)小分子與蛋白質(zhì)相互作用的研究方法、研究?jī)?nèi)容以及不同小分子與蛋白質(zhì)相互作用的研究等方面展開了評(píng)述，最后探討了化學(xué)計(jì)量學(xué)在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用。 第二部分：用熒光光譜法研究了抗抑郁藥．鹽酸曲唑酮(TZH)與BSA的相互作用，初步探討了TZH對(duì)BSA熒光的猝滅機(jī)理，并用熒光猝滅法測(cè)定了TZH與BSA相互作用的位點(diǎn)數(shù)，n和結(jié)合常K。然后根據(jù)不同溫度下的

3、熱力學(xué)常數(shù)確定了TZH與BSA之間的作用力類型。本節(jié)還探討了site Ⅰ標(biāo)記藥物保泰松與siteⅡ標(biāo)記藥物布洛芬與TZH的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用，并根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)合位上藥物的置換作用確定了TZH在BSA上的作用位點(diǎn)為site Ⅰ。 第三部分：用光譜法研究了抗結(jié)核藥毗嗪酰胺與BSA的相互作用，初步探討了吡嗪酰胺對(duì)BSA熒光的猝滅機(jī)理為靜態(tài)猝滅，并用熒光猝滅法測(cè)定了作用的位點(diǎn)數(shù)n和結(jié)合常數(shù)K。根據(jù)不同溫度下的熱力學(xué)常數(shù)確定了吡嗪酰胺與BSA之間

4、的作用力主要是氫鍵和范德華力作用。根據(jù)F6rster非輻射能量轉(zhuǎn)移原理，測(cè)定了實(shí)驗(yàn)條件下吡嗪酰胺與BSA相互結(jié)合時(shí)，能量授體．受體的結(jié)合距離。并用同步熒光和紫外光譜法研究了吡嗪酰胺對(duì)BSA構(gòu)象的影響。 第四部分：用熒光光譜法，紫外光譜法和電化學(xué)方法研究了生理?xiàng)l件下黃酮類中藥小分子槲皮素(quereetin])與BSA的相互作用。熒光法主要分為兩部分：熒光猝滅和熒光敏化。為了確定槲皮素在BSA上的作用位點(diǎn)，引入site Ⅰ標(biāo)記藥物

5、華法林(warfarin)。紫外和熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明，槲皮素與華法林之間存在協(xié)同作用，它們之間形成了quercetin-BSA-warfarin三元絡(luò)合物，槲皮素與華法林作用在BSA上的相同位點(diǎn)，都在BSA的site Ⅰ。三種物質(zhì)(quercetin-BSA，warfarin，quercetin-BSA-warfarin)的紫外光譜重疊比較嚴(yán)重，化學(xué)計(jì)量學(xué)方法多元曲線分辨一交替最小二乘法(MCCR-ALS)用于解析三者相互作用的二維紫

6、外數(shù)據(jù)，得到了三者相互作用的絡(luò)合比和平衡常數(shù)。 第五部分：本文用熒光光譜法研究了抗生素類藥物四環(huán)素(TC)與BSA的相互作用。為了突破傳統(tǒng)的標(biāo)記藥物的局限性，嘗試了開發(fā)新的染料熒光探針曙紅Y(EY)。熒光競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)主要分為兩個(gè)部分：第一部分是用經(jīng)典的site Ⅰ標(biāo)記藥物華法林(WF)來(lái)確定嘗試開發(fā)的染料探針EY在BSA上的作用位點(diǎn)，采集了二維熒光數(shù)據(jù)，并用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法多元曲線分辨一交替最小二乘法(MCR-ALS)對(duì)采集的二維數(shù)據(jù)