水稻稻瘟病抗性基因Pita2候選基因功能的初步分析.pdf

1、稻瘟病是水稻生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一,嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量。開(kāi)展稻瘟病新抗性基因的鑒定和研究對(duì)抗病育種具有重要的實(shí)際意義。稻瘟病新抗性基因Pita2比Pita抗譜更廣，為抗稻瘟病育種提供了一個(gè)新的抗源。本研究在Pita2精細(xì)定位和物理作圖的基礎(chǔ)上，為對(duì)該基因的候選基因進(jìn)行了預(yù)測(cè)注釋和表達(dá)分析，并且利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化對(duì)候選基因功能進(jìn)行了初步的分析，主要結(jié)果如下：
　　 1.利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)中日本晴的參考序列，通過(guò)生物信息學(xué)軟件對(duì)

2、目的基因區(qū)域進(jìn)行了候選基因的預(yù)測(cè)注釋?zhuān)Y(jié)果表明，在目的基因區(qū)域共有10個(gè)候選基因，其中有5個(gè)基因編碼區(qū)僅100-200bp，因此選擇另外大小合適的5個(gè)基因作為該基因的候選基因，分別命名為：Pita2-1，Pita2-2，Pita2-3，Pita2-4，Pita2-5。本研究進(jìn)一步利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)對(duì)Pita2的這些候選基因進(jìn)行了表達(dá)分析，結(jié)果表明，5個(gè)候選基因中有2個(gè)基因在稻瘟病菌接種前后均不表達(dá)的，可能是假基因

3、，另外3個(gè)基因均表達(dá)，可能是有功能的基因。
　　 2.將5個(gè)候選基因中能從抗病品種PiNo.4擴(kuò)增出來(lái)的4個(gè)候選基因全長(zhǎng)構(gòu)建功能互補(bǔ)載體，并對(duì)感病品種日本晴進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，對(duì)T0代的部分轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行稻瘟病菌研53-33孢子噴霧接種，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Pita2-2和Pita2-5的轉(zhuǎn)基因植株抗病性與是否轉(zhuǎn)入插入片段沒(méi)有直接聯(lián)系，可能這兩個(gè)候選基因并不是Pita2的真實(shí)基因，繼續(xù)鑒定其他候選基因來(lái)找出Pita2。
　　 3.依據(jù)三個(gè)