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1、目前,研究NF-κB調(diào)控靶基因表達(dá)常用的研究手段是:①電泳遷移率改變實(shí)驗(yàn)(EMSA),確定是否具有與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的作用位點(diǎn);②South-western,確定探針結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子的分子量;③抗體超遷法,研究是哪個(gè)亞基在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮主要作用.這些技術(shù)方法成熟、規(guī)范,但仍存在不足,如①實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能最終確定該轉(zhuǎn)錄因子的確是靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分子.②缺乏細(xì)胞水平或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證.因此,如能特異性阻斷轉(zhuǎn)錄因子表達(dá),再檢測(cè)受調(diào)控的靶基因是否發(fā)生
2、改變,就能驗(yàn)證上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果.RNA干涉(RNAi)技術(shù)阻斷基因表達(dá)具有高穩(wěn)定、高效率和高特異的特點(diǎn),是當(dāng)前研究基因功能最有力的工具之一,利用RNAi技術(shù)特異阻斷NF-κB的表達(dá),在細(xì)胞水平分析驗(yàn)證NF-κB對(duì)Hepcidin的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用并研究其分子機(jī)制是該課題的出發(fā)點(diǎn).研究目的探討轉(zhuǎn)錄因子NF-κB參與Hepcidin基因急性時(shí)相表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的可能性;`分析NF-κB參與Hepcidin基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制.結(jié)論1. 轉(zhuǎn)錄因子NF
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