牛泡沫病毒指示細(xì)胞系的建立與應(yīng)用.pdf

1、泡沫病毒屬反轉(zhuǎn)錄病毒科，具有廣泛的宿主范圍卻至今未發(fā)現(xiàn)其致病性，是良好的基因轉(zhuǎn)移載體骨架。在泡沫病毒感染的細(xì)胞中，許多并不發(fā)生形態(tài)上的變化，不能通過細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)方法檢測(cè)其感染狀態(tài)。為此本文建立了一套可以簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、敏感并快速的檢測(cè)感染的方法。 利用BFV感染細(xì)胞后可以激活BFV的長(zhǎng)末端重復(fù)序列LTR，在LTR下連入egfp基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞。經(jīng)過G418的篩選LTR-egfp穩(wěn)定整合細(xì)胞株，經(jīng)三次單克隆化，

2、最終從48株陽性克隆中得到一株本底表達(dá)水平最低，在BFV感染后GFP得以高效表達(dá)的細(xì)胞，命名為BICL(BFVindicatorcellline)。 對(duì)于可以出現(xiàn)CPE的情況，通過觀測(cè)BICL中GFP的表達(dá)情況，用TCID50的方法檢測(cè)BFV的滴度：同傳統(tǒng)的觀測(cè)CPE的方法比較，BICL方法在感染后5-6天就可以檢測(cè)到最終滴度，而CPE則需8-9天。同時(shí)，前者比后者靈敏度高出100倍。對(duì)于共培養(yǎng)和裂解液兩種感染手段的比較表明，B

3、ICL與CPE方法測(cè)到的結(jié)果都表明共培養(yǎng)比裂解液中病毒滴度高1000倍。這說明BICL不僅結(jié)果可靠，而且比CPE的方法更加快速，靈敏。 對(duì)于CPE無法檢測(cè)的病毒潛伏性感染，BICL中GFP表達(dá)可指示其感染。本文成功檢測(cè)了BFV3026以及感染性質(zhì)粒pCMV-BFV在HeLa和293T細(xì)胞中的感染情況，建立了基于BICL的檢測(cè)體系。 利用BICL體系，本文跟蹤了BFV3026在FBL細(xì)胞中的感染隨時(shí)間的變化情況，同時(shí)對(duì)BF