缺氧誘導因子2(HIF-2α)在胰腺癌中調控上皮間質轉化(EMT)的機制研究.pdf

1、第一部分、缺氧誘導因子2（HIF-2α）在胰腺癌中的表達及臨床意義
　　目的：研究缺氧誘導因子2（HIF-2α）在胰腺癌和癌旁非癌胰腺組織中的表達，并進一步探究HIF-2α在胰腺癌中的臨床意義。
　　方法：
　?。?）用免疫組織化學法（immunohistochemistry,IHC）檢測70例胰腺癌患者癌組織和癌旁非癌胰腺組織標本中HIF-2α蛋白的表達。
　?。?）分析70例胰腺癌組織中HIF-2α表達與臨床

2、病理因素之間的相關性。
　　（3）用IHC檢測70例胰腺癌中上皮鈣依賴粘附蛋白（E-cadherin）表達情況，并分析E-cadherin與HIF-2α表達的相關性。
　　結果：
　?。?）HIF-2α主要表達于細胞胞質及胞核，在胰腺癌組織中陽性率為67.1％（47/70），在相應非癌胰腺組織中陽性率為11.4%（8/70）。HIF-2α在胰腺癌組織中的陽性率明顯高于非癌胰腺組織，兩者的差異有統(tǒng)計學意義（χ2=45.5

3、49，P<0.05），而且HIF-2α的表達與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結轉移密切相關，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　?。?）胰腺癌患者中胰腺癌組織的E-cadherin表達水平（21/70）明顯低于相應癌旁正常胰腺組織（43/70），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=13.931，P<0.05）。
　　（3）胰腺癌組織中HIF-2α的表達與E-cadherin的表達呈負相關關系（Spearman，r=-0.394，P<0

4、.05）。
　　結論：HIF-2α蛋白在胰腺癌中高表達，并且胰腺癌組織中HIF-2α蛋白的高表達與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結轉移密切相關。E-cadherin在胰腺癌組織中低表達，且胰腺癌組織中HIF-2α的表達與E-cadherin的表達呈負相關性，提示在胰腺癌中HIF-2α可能通過調控E-cadherin的表達促進EMT的發(fā)生，參與胰腺癌的侵襲及轉移。
　　第二部分、在胰腺癌細胞中HIF-2α調控EMT的作用及其調控

5、機制研究
　　目的：觀察在胰腺癌細胞中HIF-2α對上皮間質轉化（Epithelial-mesenchymaltransition,EMT）的作用，并進一步探討可能的調控機制。
　　方法：
　　（1）構建針對HIF-2α基因的小干擾RNA載體和過表達載體，通過慢病毒轉染人胰腺癌細胞，采用蛋白質免疫印跡法（Western blot）檢測靶向調控HIF-2α的效果。
　?。?）在胰腺癌細胞中調控HIF-2α的表達后，

6、通過侵襲實驗（cell invasion assay）和劃痕實驗（wound healing assay）觀察HIF-2α對胰腺癌細胞侵襲及遷移能力的影響，并通過Western blot檢測HIF-2α對EMT相關蛋白的作用。
　?。?）在胰腺癌細胞中調控HIF-2α后通過Western blot檢測EMT相關轉錄因子Twist1/2表達的變化。
　　（4）通過染色質免疫共沉淀（chromatin immunoprecipi

7、tation assay，ChIP）方法研究Twist1/2與EMT特異性蛋白E-cadherin的作用與位點。
　?。?）在胰腺癌組織中通過 IHC檢測Twist1/2和E-cadherin的表達，分析其相關性。
　　結果：
　　（1）上調HIF-2α表達后，胰腺癌細胞的侵襲及轉移能力增強，下調HIF-2α表達后胰腺癌細胞的侵襲及轉移能力下降。
　　（2）在胰腺癌細胞中 HIF-2α調控EMT相關蛋白的表達，即

8、上調HIF-2α后，E-caherin表達下降（P<0.01），MMP2和MMP9的表達上升（P<0.01）；下調HIF-2α后，E-caherin表達上升（P<0.01），而MMP2和MMP9的表達下降（P<0.01）。
　?。?）在胰腺癌細胞中HIF-2α調控Twist1/2的表達，Twist2可與E-cadherin的啟動子區(qū)結合。
　　結論：在胰腺癌細胞中HIF-2α參與EMT的發(fā)生發(fā)展，促進胰腺癌的侵襲和轉移。EM