LCN-2對卵巢癌SKOV3細胞增殖及遷移的影響.pdf

1、卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，病死率極高，嚴重威脅著廣大婦女的身心健康。由于缺乏有效的篩查手段，多數(shù)患者確診時已處于晚期。在卵巢癌有明顯癥狀時血清CA125、CA199等可作為監(jiān)測病情的腫瘤抗原標記物，其敏感性較高，但特異性較差。為此，我們建立卵巢癌細胞模型尋找特異性腫瘤抗原標記物，并檢測其在卵巢癌中的表達情況、以及對卵巢癌細胞增殖及遷移的影響，為今后進一步探討卵巢癌發(fā)病機制提供實驗依據(jù)，以期為卵巢癌的防治提供新的思路和靶點。<

2、br>　　目的：脂質(zhì)運載蛋白-2(lipocalin-2,LCN-2)屬于脂質(zhì)運載蛋白家族的第2號成員，LCN-2的上調(diào)與肝癌，乳腺癌，卵巢癌等多種人類腫瘤相關。然而，LCN-2在腫瘤細胞中的生物學作用還不是很清楚。本研究通過觀察LCN-2在四種卵巢癌細胞系中的表達情況，并使用穩(wěn)定過表達LCN-2的方法檢測其對卵巢癌細胞增殖及遷移的影響，為進一步研究LCN-2在卵巢癌細胞中的作用機制提供前期實驗依據(jù)。
　　方法：應用RT-qPCR

3、技術在mRNA水平上檢測四種卵巢癌細胞系（CAOV3,ES2,OVCAR3,SKOV3）中LCN-2的表達情況；應用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法觀察過表達LCN-2對卵巢癌SKOV3細胞生長的影響；應用MTT細胞增殖實驗檢測過表達LCN-2對卵巢癌SKOV3細胞增殖的影響；應用細胞劃痕實驗檢測過表達LCN-2對卵巢癌SKOV3細胞遷移的影響。
　　結果：
　　1、RT-qPCR結果顯示：在mRNA水平上LCN-2的表達在四種卵巢癌細胞系中由高

4、到低的趨勢是：在CAOV3和OVCAR3呈高表達，在SKOV3表達較弱，在ES2表達最弱，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2、成功構建LCN-2穩(wěn)定過表達的SKOV3細胞克隆。
　　穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體或目的質(zhì)粒的SKOV3細胞系后，用1200μg/mlG418進行篩選，約四周后細胞克隆形成。RT-qPCR和Westernblot方法檢測結果顯示，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LCN-2基因的SKOV3細胞中LCN-2蛋白表達量均顯著高于未轉(zhuǎn)

5、染組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SKOV3細胞克隆和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LCN-2后的SKOV3細胞克隆形態(tài)無明顯變化。
　　3、MTT細胞增殖實驗繪制細胞生長曲線，結果顯示：過表達LCN-2與對照組比較，對卵巢癌SKOV3細胞增殖具有促進作用，結果有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4、劃痕實驗結果顯示：過表達LCN-2與對照組相比，明顯促進了卵巢癌SKOV3細胞的遷移，結果有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。