特立氟胺在肝癌細(xì)胞中的作用研究.pdf

1、目的：為了驗證特立氟胺的抗腫瘤作用，本實驗進行了特立氟胺對肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖、周期、凋亡等細(xì)胞功能實驗，并通過基因芯片來分析特立氟胺對lncRNA和mRNA表達(dá)譜的影響，從而探討特立氟胺的抗腫瘤作用的機制。
　　方法：培養(yǎng)肝癌細(xì)胞SMMC-7721并實施細(xì)胞功能實驗如增殖、周期、凋亡等。為了研究特立氟胺的作用機制，我們采用基因芯片分析lncRNA及mRNA表達(dá)譜的影響，并通過GO分析及pathway分析分析與之相關(guān)的

2、基因和通路。
　　結(jié)果：
　　1.特立氟胺影響肝癌細(xì)胞的增殖
　　本實驗采用CCK8法分別測定經(jīng)過特立氟胺處理過的細(xì)胞以及正常對照組細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果表明，特立氟胺具有明顯的抑制肝癌細(xì)胞增殖作用，而且這種作用呈時間及濃度依賴性。
　　2.特立氟胺降低肝癌細(xì)胞的克隆形成能力
　　特立氟胺可明顯抑制肝癌細(xì)胞的克隆形成能力，這種抑制作用在25uM及50uM濃度時表現(xiàn)明顯，在100uM濃度時表現(xiàn)出完全的抑制作用。

3、
　　3.特立氟胺可以促進肝癌細(xì)胞凋亡
　　特立氟胺可以明顯促進肝癌細(xì)胞凋亡且有明顯的濃度依賴性。特立氟胺藥物作用48小時以后，在濃度梯度為25uM,50uM,100uM、200uM時，所測得的總凋亡百分比分別是9.8％、18.9%、44.2%、90.3%。
　　4.特立氟胺可以將肝癌細(xì)胞周期阻滯在S期
　　特立氟胺具有明顯的細(xì)胞周期阻滯作用，其將細(xì)胞周期阻滯在S期，這種作用也具有明顯的濃度依賴性。特立氟胺作用4

4、8小時以后，處于S期細(xì)胞所占的比例由4.01%(正常對照)上升的到33.98%(特立氟胺,50uM)，57.65%(特立氟胺,100uM）。
　　5.Microarray Analysis
　　正常對照組與經(jīng)過特立氟胺作用的實驗組細(xì)胞lncRNA、mRNA表達(dá)譜明顯不同。對于lncRNA來講，共有2085種lncRNA出現(xiàn)表達(dá)差異；其中藥物處理的實驗組細(xì)胞相對于正常對照組細(xì)胞共有389種上調(diào)的lncRNA和1446種下調(diào)的l

5、ncRNA；對于mRNA來說，經(jīng)過藥物處理的實驗組細(xì)胞與正常對照組細(xì)胞共計有1561mRNA出現(xiàn)表達(dá)差異，其中藥物處理的實驗組細(xì)胞相對于正常對照組細(xì)胞有389種上調(diào)的mRNA和1172種下調(diào)的mRNA。GO分析和pathway分析結(jié)果表明一些基因及通路參與特立氟胺的作用機制中。
　　結(jié)論：
　　1.特立氟胺可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖、阻滯細(xì)胞周期在S期，并可以促進細(xì)胞凋亡。
　　2.特立氟胺的抗腫瘤作用可能通過影響lncR