制備傷寒疫苗大腸桿菌發(fā)酵過(guò)程的質(zhì)量控制及影響.pdf

1、近幾年來(lái)，GMP、GLP及相關(guān)質(zhì)量控制的理念逐漸深入到生物制品生產(chǎn)及實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過(guò)程中。蘭州生物制品研究所第一研究室研制的傷寒Vi多糖蛋白結(jié)合疫苗是以重組銅綠假單胞菌外毒素A（rEPA）為蛋白，由大腸桿菌表達(dá)，因此，宿主大腸桿菌發(fā)酵后菌群質(zhì)量和量的高低直接影響了傷寒Vi多糖蛋白結(jié)合疫苗的產(chǎn)量。
　　本次試驗(yàn)是根據(jù)GMP的相關(guān)質(zhì)量控制要求，運(yùn)用質(zhì)量管理手段和工具，對(duì)宿主大腸桿菌發(fā)酵過(guò)程及其涉及的相關(guān)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)實(shí)施質(zhì)量控制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

2、
　　1、實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)的影響性評(píng)估。依據(jù)系統(tǒng)影響性評(píng)估原理，對(duì)傷寒Vi多糖蛋白結(jié)合疫苗實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)進(jìn)行了系統(tǒng)影響性評(píng)估，該階段評(píng)估結(jié)果為：
　?。?）直接影響系統(tǒng)包括：空氣凈化系統(tǒng)、工藝用水系統(tǒng)、工藝氣體系統(tǒng)、發(fā)酵系統(tǒng)、高壓滅菌系統(tǒng)、干熱滅菌系統(tǒng)、實(shí)驗(yàn)室檢定系統(tǒng)、生物安全柜，中空纖維系統(tǒng)、層析系統(tǒng)、37℃恒溫培養(yǎng)、地秤、藥品保存箱、37℃搖床式培養(yǎng)箱；
　?。?）間接影響系統(tǒng)為：冰箱、配電系統(tǒng)；
　?。?）無(wú)影響系統(tǒng)

3、是：消防系統(tǒng)、洗衣機(jī)。
　　2、發(fā)酵系統(tǒng)關(guān)鍵組分評(píng)估。依據(jù)關(guān)鍵組分評(píng)估原理，對(duì)大腸桿菌發(fā)酵系統(tǒng)進(jìn)行了關(guān)鍵組分評(píng)估，該階段評(píng)估結(jié)果為：
　?。?）發(fā)酵系統(tǒng)的關(guān)鍵組分，包括：罐體、pH傳感器、DO傳感器、溫度傳感器、計(jì)算機(jī)控制單元、攪拌器、轉(zhuǎn)速傳感器、消泡漿、消泡傳感器、流量計(jì)、壓力表、CIP控制單元。
　?。?）發(fā)酵系統(tǒng)的非關(guān)鍵組分，包括：夾套、進(jìn)料口、出料口、人孔、電機(jī)、控制閥門(mén)、電路。
　　3、風(fēng)險(xiǎn)管理。該階段

4、經(jīng)過(guò)風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別、風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，最終確定出實(shí)驗(yàn)中各組分的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別：pH值、DO值、溫度、系統(tǒng)壓力及發(fā)酵系統(tǒng)的無(wú)菌性為發(fā)酵過(guò)程中的高風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)控制。
　　4、高風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)的管控。該階段分為驗(yàn)證和計(jì)量?jī)蓚€(gè)部分：
　　（1）驗(yàn)證部分：實(shí)驗(yàn)針對(duì)直接影響系統(tǒng)中的脈動(dòng)真空滅菌器、生物安全柜和發(fā)酵罐進(jìn)行了驗(yàn)證，通過(guò)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)脈動(dòng)真空滅菌器存在溫度漂移現(xiàn)象，經(jīng)過(guò)維修和調(diào)試后再次驗(yàn)證，其滅菌能力符合GMP要求。
　　（2）計(jì)量部分

5、：根據(jù)關(guān)鍵組分評(píng)估和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果，對(duì)pH傳感器、DO傳感器、溫度傳感器、系統(tǒng)壓力表、流量計(jì)、轉(zhuǎn)速傳感器以及實(shí)驗(yàn)室檢定系統(tǒng)中的分光光度計(jì)、pH計(jì)、電子天平、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、顯微鏡等儀器設(shè)備進(jìn)行計(jì)量，對(duì)故障壓力表進(jìn)行了更換。
　　5、宿主大腸桿菌的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。在實(shí)施質(zhì)量控制前后分別對(duì)宿主大腸桿菌進(jìn)行了連續(xù)三批發(fā)酵培養(yǎng)，通過(guò)培養(yǎng)結(jié)果對(duì)比可知，質(zhì)量控制后的發(fā)酵結(jié)果優(yōu)于質(zhì)量控制前，菌體密度（OD600值）由17～25之間增加至27～3