CD151缺失的結(jié)腸癌細胞中Wnt信號通路的變化對腫瘤血管生成作用的實驗研究.pdf

1、結(jié)直腸癌（Colorectal Cancer，CRC）是目前最常見的惡性腫瘤之一，而且發(fā)病年齡日趨年輕化，可能與人們逐漸西方化的飲食及生活方式有關(guān)。近年來隨著診斷技術(shù)和治療水平的提高，結(jié)直腸癌患者的生存期明顯延長，但晚期結(jié)直腸癌依然是我國癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一。因此如何抑制腫瘤的進展成為亟待解決的難題。人們發(fā)現(xiàn)血管生成在腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用，其中CD151-整合素復合體可以將細胞外信號內(nèi)傳，激活細胞內(nèi)途徑，促進血管的增

2、生。近年來Wnt信號通路作為與腫瘤密切相關(guān)的信號通路引起人們廣泛關(guān)注，它可以通過對血管內(nèi)皮生長因子的調(diào)控影響腫瘤血管的生成，但CD151是否能通過Wnt信號通路調(diào)節(jié)腫瘤的血管生成，目前尚不明確。
　　目的：本實驗以人結(jié)腸癌細胞（HT29）為參考對照，檢測敲除CD151基因的HT29細胞（CD151--HT29）中β-catenin基因及蛋白的表達變化，并對比觀察兩種細胞裸鼠移植瘤的生長及血管增生的差異，探討CD151基因的表達通過

3、結(jié)腸癌中Wnt/β-catenin信號通路影響血管增生的機制。
　　方法：
　　1運用細胞培養(yǎng)技術(shù)對HT29細胞及CD151--HT29細胞進行貼壁培養(yǎng)，觀察其生長狀態(tài)，選取對數(shù)生長期的HT29細胞及CD151--HT29細胞，經(jīng)過CK20檢測后用于細胞實驗及動物造模。
　　2運用western blotting技術(shù)分別檢測HT29細胞和CD151--HT29細胞CD151蛋白的表達情況。
　　3運用Real-T

4、ime PCR技術(shù)分別檢測HT29細胞和CD151--HT29細胞β-catenin mRNA的表達，探究CD151基因缺失狀態(tài)對β-catenin基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。
　　4運用western blotting技術(shù)分別檢測HT29細胞和CD151--HT29細胞β-catenin蛋白的表達，探究CD151能否在蛋白水平影響Wnt信號通路的功能。
　　5將實驗用裸鼠隨機分為2組，分別定義為 HT29細胞組和CD151--HT

5、29細胞組，將細胞接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下，建立移植瘤動物模型，每日觀察裸鼠的生存狀態(tài)及成瘤時間等情況，每三天測量腫瘤體積繪制生長曲線，21天后將荷瘤裸鼠處死，對比觀察其成瘤情況和移植瘤血管生成的差異。
　　結(jié)果：
　　1 Western blotting技術(shù)分別對實驗用 HT29細胞及 CD151－-HT29細胞進行檢測，結(jié)果顯示HT29細胞存在CD151蛋白的表達，而CD151－-HT29細胞CD151蛋白表達缺失。

6、>　　2 Real-Time PCR技術(shù)分別對HT29細胞和CD151－-HT29細胞進行檢測，結(jié)果顯示兩種細胞中β-catenin mRNA的CT值分別為(14.65±1.23)和(14.05±1.16)，說明HT29細胞β-catenin mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯高于CD151－-HT29細胞，結(jié)果差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3 Western blotting技術(shù)分別對實驗用 HT29細胞及 CD151－-HT29

7、細胞進行檢測，結(jié)果顯示HT29細胞中β-catenin蛋白的表達量高于CD151－-HT29細胞，其蛋白表達的熒光強度值分別為（0.186±0.009）、（0.168±0.010），兩者的表達量差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4移植瘤檢測
　　(1) HT29細胞組及 CD151－-HT29細胞組瘤重分別為（1.175±0.127）、(1.059±0.142)，結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明CD151－

8、-HT29組腫瘤生長受到抑制。
　　(2) HT29細胞組和CD151－-HT29細胞組移植瘤組織經(jīng)CD34染色后計算的 MVD值如下：HT29細胞組(42.20±5.36)個，CD151－-HT29細胞組(32.80±5.89)個，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1 HT29細胞移植瘤的增殖速度明顯高于敲除CD151基因HT29細胞組，推測CD151基因表達的下調(diào)有抑制結(jié)腸癌腫瘤細胞生長的作