超極化激活電流對新生大鼠海馬缺氧缺血性神經損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：
　　運用免疫組化和全細胞膜片鉗技術觀察超極化激活的環(huán)核苷酸門控（HCN）通道在海馬CA1區(qū)的分布，研究缺氧缺血前后Ih的變化以及HCN通道阻斷劑對缺氧缺血后神經元的作用，為治療新生兒缺氧缺血性腦?。℉IE）尋找新靶點提供理論基礎。
　　方法：
　　1.免疫組化染色
　　選取新生SD大鼠，對海馬HCN通道1-4亞型進行免疫組化染色，激光共聚焦顯微鏡下觀察HCN通道在海馬CA1區(qū)及椎體神經元上的分布情況。

2、r>　　對急性分離的腦片進行To-pro-3染色以標記死亡的神經元數目，觀察缺氧缺血（HI）前后及應用HCN通道阻斷劑CsCl前后海馬CA1區(qū)椎體神經元死亡數目的變化情況。
　　2.電生理記錄
　　利用全細胞膜片鉗技術，記錄新生SD大鼠急性分離腦片海馬CA1區(qū)椎體神經元的Ih，并觀察HI前后Ih及其激活動力學、自發(fā)放電等電生理特性的變化。
　　結果：
　　1.免疫組化染色結果顯示HCN1-4通道在海馬CA1區(qū)均存

3、在熒光染色。
　　2.海馬CA1區(qū)椎體神經元可記錄到呈電壓依賴相關的超極化快速激活、緩慢去活的內向電流Ih。
　　3.HI使椎體神經元Ih振幅增大，自發(fā)放電的頻率減少，而HCN通道阻斷劑使自發(fā)放電頻率增加。
　　4.海馬椎體神經元隨著HI時間的延長逐漸死亡，HCN通道阻斷劑顯著增加了死亡神經元的數量。
　　結論：
　　新生大鼠海馬CA1區(qū)表達HCN通道，HI增大椎體神經元的Ih，減少自發(fā)放電的頻率，而HCN