檸條錦雞兒肉桂酸-4-羥基化酶基因的克隆及表達分析.pdf

1、苯丙烷途徑是植物特有的次生代謝途徑,也是植物三大次生代謝途徑之一。在維管植物中，苯丙烷的終產(chǎn)物主要用于合成木質部的木質素單體和在色素合成、藥物成分及微生物與植物互作方面都發(fā)揮重要作用的黃酮類物質。肉桂酸-4-羥基化酶催化苯丙烷途徑中的第二步反應，將反式肉桂酸轉變?yōu)棣?羥基肉桂酸(即對羥基香豆酸)，在整個途徑中起著十分重要的作用。本研究首次從檸條錦雞兒中克隆到肉桂酸-4-羥基化酶基因并對其進行了表達分析，具體結果如下：
　　1運用R

2、T-PCR及 RACE技術從檸條錦雞兒中克隆到一條肉桂酸-4-羥基化酶基因的全長 cDNA序列(命名為 CkC4H)，GenBank登錄號為 HQ829860。生物信息學分析發(fā)現(xiàn) CkC4H長1685bp，具有完整的ORF，預測編碼505個氨基酸，分子量為57850.1D。結構域分析表明 CkC4H蛋白具有信號肽、跨膜結構域和典型的細胞色素P450結構域特征。CkC4H對應的gDNA序列全長4718bp，有3個外顯子和2個內含子。

3、>　　2應用實時熒光定量 RT-PCR方法檢測檸條錦雞兒不同組織部位 CkC4H的表達量發(fā)現(xiàn)，CkC4H基因在不同組織部位表達情況有所不同，其中根中表達量最高，莖中次之，葉中表達量最低。受到創(chuàng)傷后，莖與葉中 CkC4H基因均可被誘導表達，最高表達量出現(xiàn)在4小時左右，且葉中的誘導水平高于莖中。
　　3構建了過表達雙元載體35S::CkC4H并轉化野生型擬南芥，在 T3代轉基因植物中共鑒定出8個 CkC4H過表達純合株系。采用實時熒光