多重PCR同步檢測(cè)感染手部五種非結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)方法的建立.pdf

1、目的：構(gòu)建能同時(shí)檢測(cè)鳥、海、偶然、堪薩斯及潰瘍分枝桿菌等五種感染手部常見NTM的多重PCR方法，為手部NTM感染的早期診療提供實(shí)驗(yàn)方法。
　　方法：根據(jù)前期研究成果，1.通過GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)查找鳥、海、偶然、堪薩斯及潰瘍分枝桿菌等五種感染手部常見 NTM的特有基因序列，用MFEprimer-5.0及Olige6.0軟件設(shè)計(jì)引物，并用DNAMAN軟件對(duì)其進(jìn)行評(píng)估，篩選出特異性較高的引物構(gòu)建PCR。2.單一PCR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)菌

2、DNA后進(jìn)行測(cè)序，以驗(yàn)證本研究所用的標(biāo)準(zhǔn)菌是否符合要求。3.利用其引物間無互補(bǔ)或互補(bǔ)性較小的特點(diǎn)，構(gòu)建能同時(shí)檢測(cè)上述五種NTM的多重PCR，通過優(yōu)化多重PCR的退火溫度，評(píng)估其特異性及敏感性。4.用該多重PCR檢測(cè)并鑒定12份臨床考慮手部NTM感染的標(biāo)本。
　　結(jié)果：1.成功為上述五種分枝桿菌設(shè)計(jì)了5對(duì)特異性引物；2.單一PCR檢測(cè)本研究所用的標(biāo)準(zhǔn)菌符合要求；3.成功構(gòu)建了能同步檢測(cè)鳥、海、偶然、堪薩斯及潰瘍分枝桿菌五種常見手部N

3、TM感染的五重PCR方法；4.該五重PCR的最佳退火溫度為57.5℃，具有較高的特異性及敏感性；5.該五重PCR檢測(cè)12份臨床標(biāo)本，10份標(biāo)本擴(kuò)增出陽性條帶，檢出率為83％；6、利用該五重PCR檢測(cè)NTM可將時(shí)間縮短至4小時(shí)左右。
　　結(jié)論：本研究建立的mPCR可同步檢測(cè)鳥、海、偶然、堪薩斯及潰瘍分枝桿菌等五種手部常見的NTM感染，具有較高的特異性及敏感性。該方法可迅速將NTM鑒定至種屬及亞種水平，為臨床鑒定NTM感染并制定最佳診