GBEE對獲得性S180MDR細胞株逆轉作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　模擬臨床PFC（順鉑+氟尿嘧啶+環(huán)磷酰胺）聯(lián)合化療給藥方案，通過體內劑量遞增法誘導S180腹水瘤小鼠，獲得S180腫瘤多藥耐藥(Multi-drug resistance，MDR)細胞株并研究銀杏外種皮提取物(Ginkgo biloba exocarp extracts，GBEE)對該細胞株體內外的逆轉耐藥作用及其機制。
　　方法：
　　按臨床PFC化療方案，采用體內劑量遞增法誘導S180腹水瘤小鼠，建立獲

2、得性S180MDR模型，采用MTT法、流式細胞術動態(tài)測定低、中、高劑量所誘導細胞對化療藥物的耐藥倍數(shù)、細胞內阿霉素(Adriamycin，ADR)積累量及細胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)功能活性以監(jiān)測所誘導細胞的耐藥強度;采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法測定不同劑量所誘導細胞MDR-1mRNA、多藥耐藥相關蛋白-1(multidrugresistance-associated protein1，MRP

3、-1)mRNA的表達量。取高劑量誘導的S180MDR細胞研究GBEE的體內外逆轉耐藥作用。體外實驗:采用MTT法測定GBEE對S180MDR細胞的逆轉指數(shù)，采用流式細胞術測定GBEE對S180MDR細胞內ADR積累量、P-gp功能活性的影響;體內實驗:建立ICR小鼠S180MDR細胞腹水瘤和實體瘤模型，將小鼠隨機分為14組，每組10只，即空白組，模型組，親本細胞順鉑(cis-dichlorodiamineplatinum，DDP)3mg

4、/kg、 ADR3mg/kg單獨用藥組，耐藥細胞DDP3mg/kg、ADR3mg/kg、GBEE50、25、12.5mg/kg、維拉帕米（Verapamil，VER）15mg/kg單獨用藥組，GBEE50、25、12.5mg/kg+DDP3mg/kg聯(lián)合用藥組以及VER15mg/kg+DDP3mg/kg聯(lián)合用藥組，藥物干預1周。監(jiān)測腹水瘤小鼠的存活時間、計算實體瘤小鼠的腫瘤抑制率;采用RT-qPCR法檢測腹水瘤模型各組小鼠腫瘤細胞MDR

5、-1mRNA、MRP-1 mRNA的表達量;采用雙抗夾心ELISA法測定實體瘤模型小鼠血清白介素3(Interleukin3，IL-3)、白介素18(Interleukin18，IL-18)及γ-干擾素（Interferon-γ，IFN-γ）的濃度。
　　結果：
　　建模實驗結果顯示，與親本細胞比較，低、中、高劑量所誘導的S180細胞對化療藥物的耐藥倍數(shù)隨誘導劑量的增高而逐漸增大，細胞內ADR積累量隨之逐漸減少，細胞P-gp

6、功能活性隨之逐漸增強;所誘導S180細胞不僅對DDP、氟尿嘧啶(Fluorouracil，F(xiàn)U)產生了較強的耐藥性，且對未接觸過的、作用機制不同的ADR也具有一定程度的交叉耐藥性。所誘導S180細胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達量與誘導劑量呈正相關。體外實驗結果顯示:GBEE30、15、7.5μg/mL與S180MDR細胞體外培養(yǎng)后對DDP的逆轉指數(shù)分別為8.48、11.34、9.88; GBEE各劑量能顯著增加S180M

7、DR細胞內ADR蓄積量并抑制P-gp功能活性。體內實驗結果顯示:GBEE50、25、12.5mg/kg灌胃給藥能顯著提升DDP的抗腫瘤作用，延長S180MDR腹水瘤小鼠存活時間并抑制小鼠S180MDR實體瘤生長，其中GBEE25mg/kg聯(lián)合DDP用藥組對腹水瘤小鼠的生命延長率達37.41％，對小鼠實體瘤抑制率達65.43％（P＜0.01或P＜0.001）;GBEE各劑量能顯著抑制小鼠S180MDR腹水瘤細胞MDR-1mRNA、MRP-

8、1mRNA的表達，且能明顯提升S180MDR荷瘤小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ等細胞因子的水平(P＜0.05)。
　　結論：
　　采用PFC方案按劑量遞增法體內誘導S180腹水瘤小鼠獲得的MDR細胞模型，其耐藥強度在一定的劑量范圍內與誘導劑量呈現(xiàn)正相關性。GBEE體內外給藥對S180MDR細胞均具有較明顯的逆轉作用，其機制可能與抑制耐藥腫瘤細胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達，減少耐藥蛋白合成，并抑制P