去甲萬古霉素靜脈及鞘內(nèi)注射腦脊液藥動學(xué)研究.pdf

1、目的：建立腦脊液中去甲萬古霉素濃度的HPLC測定方法；考察神經(jīng)外科術(shù)后顱內(nèi)感染患者靜脈及鞘內(nèi)注射去甲萬古霉素后，腦脊液中藥物濃度的變化，結(jié)合臨床分析兩種給藥方式的臨床意義。
　　方法：
　　1、色譜條件:色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）；流動相為甲醇-0.025M磷酸二氫鉀緩沖鹽液（pH3.0）（18:82，V/V）；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30°C，檢測波長為236

2、nm；進樣量為20μL，內(nèi)標(biāo)：萬古霉素。
　　2、腦脊液樣品處理:取腦脊液樣品400μL，加入10％高氯酸溶液200μL，渦旋混勻1min，10000r·min-1離心5min，取上清液20μL進行HPLC分析。
　　3、線性范圍：制備50，20，10，5，2，1，0.5，0.2，0.1μg·mL-1的去甲萬古霉素腦脊液模擬樣品，按照腦脊液樣品處理后進樣分析，所得的去甲萬古霉素峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（Y）與相應(yīng)的去甲萬古霉

3、素腦脊液模擬樣品濃度（X）做線性回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，考察線性關(guān)系。
　　4、回收率：制備低，中，高三個濃度（0.2，2，40μg·mL-1）的去甲萬古霉素腦脊液模擬樣品，處理后進樣分析得去甲萬古霉素與內(nèi)標(biāo)的峰面積，分別與等量去甲萬古霉素對照品溶液及等量萬古霉素內(nèi)標(biāo)溶液直接進樣所得峰面積的比值即為去甲萬古霉素及內(nèi)標(biāo)的絕對回收率；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算去甲萬古霉素測得濃度與其理論濃度的比值即為相對回收率。
　　5、精密度:制

4、備低，中，高三個濃度的去甲萬古霉素腦脊液模擬樣品，每個濃度重復(fù)5份，在一日內(nèi)不同時間處理后測定，計算相應(yīng)濃度的日內(nèi)精密度；三個不同的工作日內(nèi)重復(fù)上述操作，每日復(fù)測標(biāo)準(zhǔn)曲線，依當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算實測濃度，計算相應(yīng)濃度的日間精密度。
　　6、穩(wěn)定性：分別考察低，中，高三個濃度的去甲萬古霉素腦脊液模擬樣品：室溫放置6，12 h；凍融循環(huán)3次；在-40℃低溫保存30，240 d及處理后樣品在室溫放置2，4 h的穩(wěn)定性?？疾斓?，中，高三個濃度

5、的去甲萬古霉素對照品溶液常溫放置4，12 h；4℃保存2，5 d的穩(wěn)定性。
　　7、床樣品采集:神經(jīng)外科術(shù)后顱內(nèi)感染且保留腰大池置管成年患者，靜脈給予去甲萬古霉素后0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，12 h分別留取腦脊液樣品2 mL；鞘內(nèi)給予去甲萬古霉素10 mg后2 h，4 h，8 h，12 h，24 h分別留取腦脊液標(biāo)本2 mL，臨床腦脊液樣品離心后取上清溶液于-40℃低溫保存?zhèn)溆谩?br>　　8、據(jù)分析：腦脊液樣品處理

6、后，應(yīng)用HPLC法測定，根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算去甲萬古霉素的濃度，采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、選定色譜條件下，去甲萬古霉素和內(nèi)標(biāo)萬古霉素峰形良好，保留時間分別為5.8 min和7.4 min。腦脊液中內(nèi)源性物質(zhì)對去甲萬古霉素測定沒有干擾。
　　2、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.679X+0.021（ R2=0.994），線性范圍0.1~50μg·mL-1。
　　3、收率:低，中，高三種不同濃度去

7、甲萬古霉素腦脊液模擬樣品的平均絕對回收率分別為（77.54±1.68）%，（79.46±2.05）%和（88.08±5.04）%；相對回收率分別為（96.90±4.84）%，（96.26±5.13）%和（102.36±3.09）%；內(nèi)標(biāo)絕對回收率（80.11±4.84）%。
　　4、密度：低，中，高三種不同濃度去甲萬古霉素模擬樣品日內(nèi)精密度RSD分別為5.00%，5.33%和3.03%日間精密度RSD分別為6.43%，3.86%和

8、8.78%。
　　5、穩(wěn)定性：去甲萬古霉素腦脊液模擬樣品室溫放置6，12 h；凍融循環(huán)3次；在-40℃低溫保存30，240 d及處理后樣品在室溫放置2，4 h后性質(zhì)穩(wěn)定。去甲萬古霉素對照品溶液常溫放置4，12 h；4℃保存2，5 d后性質(zhì)穩(wěn)定。
　　6、實驗期間共收集了19例靜脈給予去甲萬古霉素患者腦脊液樣品，其中6例效果欠佳時同時給予了鞘內(nèi)注射，靜脈給予去甲萬古霉素后0，2，4，6，8，12 h腦脊液中去甲萬古霉素濃度的均

9、值為2.81±1.91，2.28±1.49，1.31±0.81，1.01±0.67，0.72±0.56，0.50±0.47；聯(lián)合鞘內(nèi)給藥后2，4，8，12，24 h腦脊液中去甲萬古霉素濃度的均值為150.72±34.29，75.52±13.02，28.81±8.39，17.11±7.46，4.66±1.71。應(yīng)用去甲萬古霉素0.8g，q12h給藥方案，腦脊液中藥物濃度在靜脈滴注結(jié)束時高于常見致病菌 MIC（P＜0.05），靜脈滴注結(jié)束2

10、 h后可以達到常見致病菌MIC（P＞0.05），但靜脈滴注結(jié)束4 h后已經(jīng)低于常見致病菌MIC（P＜0.01）。聯(lián)合鞘內(nèi)注射10mg去甲萬古霉素后，谷濃度大于常見致病菌的MIC（P＜0.05），但仍小于理想谷濃度10μg·mL-1（P＜0.01），鞘內(nèi)注射12 h后可以達到10μg·mL-1的理想治療濃度，推測增加給藥頻次為每12h一次可以使谷濃度達到理想治療濃度。
　　結(jié)論：本實驗所建立HPLC測定腦脊液中去甲萬古霉素濃度的方法