CK20在胃癌患者外周血、淋巴結(jié)中的表達及其對預(yù)后的預(yù)測價值.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 熒光定量PCR法檢測胃癌微轉(zhuǎn)移可行性研究
　　目的:
　　探討熒光定量PCR法檢測胃癌微轉(zhuǎn)移的敏感性和特異性。
　　方法:
　　1.選取5種不同分化程度的胃癌細(xì)胞株作為研究對象，將高分化細(xì)胞株AGS的表達量設(shè)定為1.0，RT-PCR法檢測不同胃癌細(xì)胞株CK20表達情況，挑選出適合建立體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型的胃癌細(xì)胞株。
　　2.應(yīng)用10倍稀釋法和毛細(xì)管法分別將

2、105、104、103、102、101、1個SGC-7901細(xì)胞株置入健康人108外周血單核細(xì)胞中，建成含不同SGC-7901細(xì)胞數(shù)的體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型。
　　3.分別采集40例健康志愿者外周血各兩管，每管5ml。應(yīng)用熒光定量PCR法分別檢測健康志愿者兩管外周血中及體外胃癌微轉(zhuǎn)移模型中CK20mRNA表達情況以確定其檢測胃癌微轉(zhuǎn)移敏感性和特異性。
　　結(jié)果:
　　1.CK20mRNA在不同分化胃癌細(xì)胞株中均有表達，其表

3、達強度在各胃癌細(xì)胞株之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.734，P=0.181），而在PBMN中未能檢測到CK20mRNA有效表達。在各胃癌細(xì)胞株中，SGC-7901表達相對偏低，故體外模型驗證中選擇SGC-7901細(xì)胞。
　　2.對SGC-7901體外微轉(zhuǎn)移模型檢測顯示，熒光定量PCR檢測CK20mRNA微轉(zhuǎn)移敏感性為10-7。
　　3.健康志愿者第一管血標(biāo)本中，CK20熒光定量PCR檢測9例為陽性，31例陰性，假陽性率為22.

4、5％，而第二管血標(biāo)本中，1例陽性，39例陰性，假陽性率2.5％。
　　結(jié)論:
　　1.CK20在不同分化胃癌細(xì)胞株中均有表達，而在PBMN中不表達。
　　2.熒光定量PCR法檢測胃癌外周血微轉(zhuǎn)移的敏感性為10-7，特異性為97.5％，是檢測胃癌微轉(zhuǎn)移較好的檢測方法。
　　第二部分 胃癌組織中CK20的表達及意義
　　目的:
　　研究胃癌組織及正常胃粘膜組織中CK20表達情況，分析胃癌組織中CK20表達

5、與患者預(yù)后關(guān)系。
　　方法:
　　1.應(yīng)用免疫組化法檢測了85例胃癌患者腫瘤組織及胃粘膜組織中CK20表達情況。
　　2.對比CK20在胃癌組織及胃粘膜組織中表達差異。
　　3.對胃癌組織及胃粘膜組織中CK20免疫組化積分進行ROC檢驗，獲得CK20免疫組化積分的cut-off值。
　　4.根據(jù)胃癌組織中CK20免疫組化積分及cut-off值將患者分為CK20高表達組和低表達組，以Kaplan-Meier生

6、存函數(shù)分析胃癌組織中CK20表達與患者無復(fù)發(fā)生存及3年總生存的影響。
　　結(jié)果:
　　1.CK20在胃癌組織、胃粘膜組織均不同程度陽性表達。
　　2.胃癌組織中CK20免疫組化積分與胃粘膜組織中CK20免疫組化積分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.107)3.至本研究結(jié)束，所有患者隨訪3年，胃癌組織中CK20低表達者與高表達者兩組OS及DFS差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.CK20在胃癌組織

7、、胃粘膜組織均普遍陽性表達。
　　2.CK20在胃癌組織及胃粘膜組織中表達無明顯差異。
　　3.胃癌組織中CK20表達水平對患者OS及DFS無影響。
　　4.CK20可以作為檢測胃癌外周血、胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。
　　第三部分 胃癌患者外周血中CK20mRNA檢測及意義
　　目的:
　　探索應(yīng)用熒光定量PCR法檢測胃癌患者外周血中CK20mRNA表達的臨床意義。
　　方法:
　　1.應(yīng)

8、用熒光定量PCR法分別檢測了85例胃癌患者、40例良性腫瘤患者手術(shù)前及手術(shù)后外周血中CK20mRNA表達情況。
　　2.分析胃癌患者外周血中CK20mRNA陽性表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系以及手術(shù)前后檢測結(jié)果之間差異。
　　3.應(yīng)用Kaplan-Meier生存函數(shù)，分析胃癌患者術(shù)后外周血中CK20mRNA表達對胃癌術(shù)后無復(fù)發(fā)生存及3年總生存的影響。
　　結(jié)果:
　　1.手術(shù)前對照組40例良性腫瘤患者外周血中CK2

9、0mRNA檢測結(jié)果均為陰性;85例原發(fā)性胃癌患者中有35例(41.2％)外周血中CK20mRNA陽性;兩組之間差異有顯著性（x2=22.876，P=1.72×10-6）。
　　2.胃癌患者術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移與患者年齡、性別、腫瘤位置無關(guān)(P＞0.05);與腫瘤分化程度相關(guān)(P＜0.05)，與腫瘤大小、Borrmann分型、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、外周血CEA、CA724、CA199值、脈管內(nèi)有無癌栓等病理特征密切相關(guān)(P＜0.

10、01)。
　　3.手術(shù)后第一天，對照組40例良性腫瘤患者外周血中CK20mRNA檢測結(jié)果仍均為陰性;85例原發(fā)性胃癌患者中有49例(57.6％)外周血中CK20mRNA陽性，兩組之間差異有顯著性（x2=37.926，P=7.34×10-10）。胃癌患者手術(shù)后外周血中CK20mRNA表達與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤分化程度無關(guān)(P＞0.05);與腫瘤大小、Borrmann分型、腫瘤浸潤深度、胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、外周血CEA、CA

11、724、CA199值、脈管內(nèi)有無癌栓等病理特征密切相關(guān)(P＜0.01)。
　　4.手術(shù)后患者外周血CK20mRNA表達明顯高于術(shù)前，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.612，P=0.032）。
　　5.術(shù)后患者外周血CK20mRNA表達與患者術(shù)后OS、DFS相關(guān)(P＜0.05)，陽性表達者的3年總生存時間及無復(fù)發(fā)生存時間均顯著縮短。
　　結(jié)論：
　　1.CK20mRNA在胃癌患者外周血中表達有較高的特異性。

12、　　2.較多患者術(shù)前外周血存在微轉(zhuǎn)移。
　　3.胃癌患者術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移與腫瘤體積大、分化差、Borrmann分型Ⅲ～Ⅳ型、浸潤深度T3～T4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N2～N3、術(shù)前外周血中CEA、CA724、CA199升高、腫瘤組織脈管內(nèi)癌栓等因素相關(guān)。
　　4.手術(shù)操作是促進胃癌微轉(zhuǎn)移的一個重要因素。
　　5.術(shù)后患者外周血中CK20表達可以評估患者預(yù)后。
　　第四部分 CK20蛋白及基因在胃周淋巴結(jié)中的表達及其臨床意義

13、
　　目的:
　　通過對胃癌患者胃周淋巴結(jié)進行微轉(zhuǎn)移檢測，評價胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測方法，分析胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移危險因素以及微轉(zhuǎn)移對患者預(yù)后的影響。
　　方法:
　　1.對胃癌患者胃周淋巴結(jié)進行HE常規(guī)檢查、CK20免疫組化及CK20mRNA熒光定量PCR檢測。
　　2.應(yīng)用Kaplan-Meier生存函數(shù)，分析各種檢測方式證實的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對患者預(yù)后的影響。
　　3.分析各臨床病理參數(shù)與胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移

14、之間關(guān)系。
　　4.建立COX風(fēng)險預(yù)測模型，分析基線資料及臨床病理資料對胃癌患者預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色轉(zhuǎn)移陽性淋巴結(jié)行免疫組化及熒光定量PCR檢測均為陽性。
　　2.HE染色陰性淋巴結(jié)行CK20免疫組化法檢測發(fā)現(xiàn)有28枚/16例陽性;CK20mRNA熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)有137枚/34例胃周淋巴結(jié)陽性，并且免疫組化檢測呈陽性的熒光定量PCR法檢測同時均為陽性。在胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測中，熒光定

15、量PCR法靈敏度更高，與HE染色法比較采用x2檢驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.經(jīng)免疫組化法和熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)有137枚/34例胃周淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，導(dǎo)致22例患者的臨床病理分期發(fā)生相應(yīng)改變，使得胃癌臨床病理分期更趨準(zhǔn)確。
　　4.胃周淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與患者年齡、性別、腫瘤位置、HE檢查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)(P＞0.05);與腫瘤大小、Borrmann分型、外周血CEA、CA724、CA199值、外周血微轉(zhuǎn)

16、移情況相關(guān)(P＜0.05);與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、腫瘤脈管內(nèi)有無癌栓等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)(P＜0.01)。
　　5.存在胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移的患者3年總生存時間及無復(fù)發(fā)生存時間明顯低于無微轉(zhuǎn)移的患者(P＜0.05)。
　　6.COX模型統(tǒng)計分析顯示腫瘤分化、Bormann分型、浸潤深度、脈管內(nèi)癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及微轉(zhuǎn)移、外周血微轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的危險因素。
　　結(jié)論:
　　1.熒光定量PCR檢測CK2