雷公藤紅素在乳腺癌中抑制mTOR信號(hào)通路作用機(jī)制的研究.pdf

1、乳腺癌作為一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病后的死亡率已位居于女性腫瘤死亡第一位。近年統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)呈較快增長(zhǎng)趨勢(shì)，且發(fā)病年齡趨向年輕化，嚴(yán)重威脅女性健康。乳腺癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡最重要的原因。由于mTOR信號(hào)通路的過(guò)度活化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此在乳腺癌中有關(guān)mTOR靶點(diǎn)的研究成為新的研究熱點(diǎn)。但是，關(guān)于mTOR在乳腺癌的發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中所發(fā)揮作用的具體分子機(jī)制還不十分明確，推測(cè)此機(jī)制可

2、能是通過(guò)PI3K/Akt/mTOR通路發(fā)揮作用。雷公藤紅素（Celastrol，Cel），又名南蛇藤素，主要從雷公藤屬植物的根或根的木質(zhì)部中分離得到，是一種具有多種藥效活性的天然化合物。在臨床上常用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、麻風(fēng)反應(yīng)以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病。雷公藤紅素雖然很早就發(fā)現(xiàn)具有抗炎、抗腫瘤等作用，但有關(guān)其抗腫瘤機(jī)制僅在近年來(lái)才見(jiàn)部分報(bào)道。
　　目的：基于乳腺癌細(xì)胞內(nèi) PI3K/Akt/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，探討雷公

3、藤紅素抑制乳腺癌細(xì)胞中mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用及分子機(jī)制。
　　方法：雷公藤紅素處理不同乳腺癌細(xì)胞后，體外采用 MTT法測(cè)定雷公藤紅素對(duì)乳腺癌細(xì)胞活力的影響；通過(guò)Real-time PCR和Western Blot分別從基因水平和蛋白水平檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)乳腺癌細(xì)胞中mTOR的影響；放線菌酮示蹤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)mTOR蛋白穩(wěn)定性的影響；免疫共沉淀研究mTOR、Hsp90和Cdc37間的相互作用，以及檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)mTOR、H

4、sp90和Cdc37復(fù)合體的影響；MG-132和氯喹分別處理細(xì)胞后，采用Western Blot檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)mTOR蛋白降解方式的影響；Western Blot觀察雷公藤紅素處理不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)p-Akt蛋白表達(dá)的影響，通過(guò)免疫共沉淀研究雷公藤紅素升高p-Akt的機(jī)制；建立BALB/c-nu裸鼠移植瘤模型，體內(nèi)研究雙靶點(diǎn)聯(lián)合對(duì)乳腺癌 MDA-MB-231細(xì)胞移植瘤的影響；采用免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中mTOR、ki67等表達(dá)變化。<

5、br>　　結(jié)論：⑴雷公藤紅素可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，且具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性。⑵雷公藤紅素在基因水平和蛋白水平均能下調(diào)mTOR的表達(dá)，通過(guò)破壞mTOR蛋白的穩(wěn)定性，加速 mTOR經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解，從而抑制乳腺癌細(xì)胞中mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。⑶雷公藤紅素可破壞mTOR、Cdc37和Hsp90復(fù)合體的穩(wěn)定性從而抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。⑷雷公藤紅素處理后的乳腺癌細(xì)胞，由于應(yīng)激作用短時(shí)間內(nèi) p-Akt表達(dá)量會(huì)一過(guò)性增高，通過(guò)促進(jìn)pPDK1、Cd