基于液質聯(lián)用技術的右蘭索拉唑生物等效性評價和QO-58lysine在大鼠體內代謝、排泄研究.pdf

1、右蘭索拉唑屬于質子泵抑制劑，是由日本武田公司研發(fā)的治療食管炎的新藥，本藥在劑型上采用雙延遲釋放（DDR）系統(tǒng)，延長了藥物的作用時間，增強了患者的依從性，臨床療效明顯，因專利保護于2020年即將到期，因此該藥成為仿制熱點。
　　QO-58是經過高通量篩選得到的一種全新KCNQ型鉀離子通道開放劑，藥效學初步研究提示其具有抗驚厥、抗癲癇以及鎮(zhèn)痛等作用，其賴氨酸鹽（QO-58 lysine）改善了吸收，提高了療效，在完成了前期藥理、毒理及

2、部分藥代、毒代研究的基礎上，開展本次體內代謝、排泄研究，為新藥的研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　LC-MS/MS技術是將液相色譜分離與質譜檢測手段相結合的技術，具有分離能力強、監(jiān)測靈敏度高和專屬性強等特點，成為新藥研發(fā)和體內外藥物分析的重要手段。本課題運用此技術研究了國內高仿的武田Dexilant產品（右蘭索拉唑緩釋膠囊）在Beagle犬體內的生物等效性，為一致性評價提供實驗參考；同時還研究了QO-58 lysine在大鼠體內的排泄動力學

3、，分析了QO-58 lysine在大鼠體內的多種代謝產物，該研究結果為進一步的開發(fā)利用QO-58 lysine提供了重要的實驗依據(jù)。
　　第一部分：右蘭索拉唑緩釋膠囊在Beagle犬體內的生物等效性評價
　　目的：
　　研究右蘭索拉唑的受試藥物和參比藥物（Dexilant）在Beagle犬體內是否具有生物等效特征。
　　方法：
　　1.樣品收集：本實驗采用雙周期隨機交叉設計，每一個周期，飼喂30mg右蘭索拉

4、唑緩釋膠囊。從Beagle犬腿部靜脈處采集血液至真空肝素管，分別收集給藥前和給藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h時間點的血液樣本。
　　2.樣品預處理：采用液液萃取法（乙酸乙酯）進行處理。
　　3.檢測條件：采用Phenomenex C18分析柱，流動相為甲醇（A）：2 mM乙酸銨水溶液（B），采用梯度洗脫程序。檢測方式為正離子、多離子反應監(jiān)測（MRM）

5、，用于定量分析的離子反應分別為m/z369.8→252.0（右蘭索拉唑），m/z345.9→198.0（內標，IS，奧美拉唑）。
　　4.生物等效性：計算藥代動力學參數(shù)，對 AUC0-t、AUC0-∞、Cmax經過對數(shù)轉換后，采用雙單側t檢驗法進行檢驗，判斷兩種制劑是否生物等效。
　　結果：
　　1.右蘭索拉唑在Beagle犬血漿中的線性關系良好（r≥0.9960），日內精密度和日間精密度符合要求，無明顯基質效應，穩(wěn)定

6、性良好。
　　2.單劑量給予試驗藥物和參比藥物，血漿中右蘭索拉唑的主要藥代動力學參數(shù)（AUC0-t、AUC0-∞和Cmax）經對數(shù)轉換后進行雙單側 t檢驗，其結果說明兩種制劑間沒有顯著性差異。
　　結論：
　　本實驗建立的LC-MS/MS方法，具有簡單可靠等特點，能夠滿足生物樣品的分析要求。兩種右蘭索拉唑緩釋膠囊在 Beagle犬體內具有相似的體內過程以及藥代動力學特征，兩者具有生物等效性。
　　第二部分：液質聯(lián)

7、用法測定大鼠尿液、糞便和膽汁中QO-58 lysine的含量及排泄動力學研究
　　目的：
　　建立QO-58 lysine在大鼠尿液、糞便和膽汁中的液質聯(lián)用方法（LC-MS/MS），并對其進行排泄動力學研究。
　　方法：
　　1.樣品收集：以50 mg/kg的劑量灌胃給予QO-58 lysine后，采用代謝籠收集其0~4、4~8、8~12、12~24、24~36、36~48、48~60以及60~72 h的尿液與糞

8、便樣品。麻醉后對大鼠進行膽管插管，縫合后在清醒狀態(tài)下收集0~4、4~8、8~12、12~16、16~20、20~24、24~28、28~32、32~36、36~40、40~48、48~52、52~56、56~60、60~64、64~68和68~72 h的膽汁樣品。
　　2.樣品的預處理：尿液和膽汁采用液液萃取法；糞便采用乙腈沉淀法。
　　3.檢測條件：采用Phenomenex C18分析柱，乙腈（A）和2 mmol/L

9、>　　乙酸銨和0.2％(v/v)甲酸的水溶液（B）為流動相，流速為0.5 ml/min。采用電噴霧離子源、正離子模式、多反應監(jiān)測進行檢測，內標物（IS）為尼莫地平。被測成分的離子對分別為QO-58 lysine m/z443.1→361.1，尼莫地平m/z419.2→343.2。
　　結果：
　　1.QO-58 lysine在尿液、糞便和膽汁中的線性關系良好（r≥0.9943），日內精密度和日間精密度均符合要求，基質效應69

10、.48%~99.57%，穩(wěn)定性良好；
　　2.72 h尿液的累計排泄率為(0.0245±0.0324)%，糞便的累計排泄率為(92.94±4.71)%，膽汁的累計排泄率為(2.05±0.68)%。
　　結論：
　　1.本實驗采用 LC-MS/MS方法對大鼠的尿液、糞便和膽汁中 QO-58 lysine的含量進行測定，該方法簡便快捷、特異性強、穩(wěn)定性好、準確度高。經方法學研究表明，LC-MS/MS方法能夠滿足樣品測定的要

11、求。
　　2.QO-58 lysine在灌胃給藥后主要經過糞便排泄，一部分經過膽汁排泄，極少量通過尿液排泄。另外，約有7%的藥物有待探明去向，可能是在肝臟等器官中產生了一些新的代謝產物。
　　第三部分 QO-58 lysine在大鼠體內的代謝研究
　　目的：
　　建立LC-MS/MS和HPLC-QTOF-MS的方法，分離篩選并且分析推測QO-58 lysine在大鼠尿液和膽汁中的代謝產物。
　　方法：

12、>　　1.采用Phenomenex C18分析柱，流動相為乙腈（A）和2 mmol/L乙酸銨和0.2%甲酸的水溶液（B），梯度洗脫，質譜采用電噴霧離子源。
　　2.大鼠灌胃給予QO-58 lysine50 mg/kg，分別收集尿液和膽汁。采用液液萃取法對尿液和膽汁樣品進行濃縮和處理。采用高效液相色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質譜（HPLC-QTOF-MS）技術分析樣品，正/負離子模式，全掃描采集。
　　3.數(shù)據(jù)采集完畢后，先使用“M

13、etabolitepilot1.5”中的“碎片和中性丟失虧損過濾（Fragment and Neutral loss defect filter）”功能對其中的代謝物進行初步的篩選；之后再使用“Peakview2.2”中的“Masterview”功能，針對之前初步篩選的結果進行更進一步的分析，對比有關化合物的精確分子量、分子式、二級質譜圖、保留時間及質譜信息，對其結構進行推測。最后根據(jù)代謝物結構推測其代謝途徑。
　　結果：

14、　　根據(jù)生物體內藥物的代謝轉化的規(guī)律以及母體藥物總結的裂解規(guī)律，在大鼠體內檢測出11種代謝產物，其中I相代謝產物8種，II相代謝產物3種。并對各個代謝產物的代謝途徑進行了解析。
　　結論：
　　1.本實驗總共檢測到11種代謝產物。QO-58 lysine所檢測到的I相代謝產物可以發(fā)生鹵素原子的消除反應、羥基化和雙羥基化反應；II相代謝物可以發(fā)生硫酸化、葡萄糖醛酸化反應以及與 N-乙酰半胱氨酸的結合反應。
　　2.建立了