大鼠肝腎纖維化復合動物模型的建立及機制初探.pdf

1、目的:
　　動物模型是醫(yī)藥科學領域最重要的研究工具之一，這是因為建立模擬特定狀態(tài)的模型對于特定病癥的研究具有重要意義。雖然慢性肝病(CLD)與腎病之間的聯(lián)系已被證實，且二者常呈現(xiàn)器官纖維化，但是尚缺乏用于研究疾病發(fā)展規(guī)律的肝腎纖維化復合動物模型。因此，此次實驗目的就是以大鼠為實驗對象建立一個廉價、省時、可復制的肝腎纖維化模型，并對相關機制進行初步探討。
　　方法:
　　在此實驗中，將25只雌性Wistar大鼠隨機分成四

2、組，其中模型組10只，牛血清白蛋白組、四氯化碳組和對照組各5只。模型組動物腹腔注射濃度為30％的四氯化碳油溶液，每周兩次，連續(xù)10周;同時腹腔注射1克牛血清白蛋白溶液，每天一次，連續(xù)8周，第9周和第10周各注射5次。牛血清白蛋白組、四氯化碳組分別注射牛血清白蛋白和四氯化碳，方法和劑量同模型組。對照組不作處理。每兩周稱一次動物體重，并記相關數(shù)據(jù)。在實驗末，用代謝籠收集24小時尿液并檢測其中總蛋白質含量;采血進行肝腎功能相關的生化指標檢測;

3、處死所有動物后，取肝臟和腎臟組織，進行固定或冷凍。制作石蠟切片，蘇木精-伊紅染色，觀察病理形態(tài)改變，天狼猩紅染色觀察纖維化程度，α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫組織化學染色了解肌纖維母細胞數(shù)量;制作冰凍切片，免疫熒光法檢測腎組織lgG、IgM、IgA、C3、C1q沉積情況;電子顯微鏡觀察腎組織超微結構。
　　結果:
　?、俑鹘M動物體重均增加。其中體重增加最多的是牛血清白蛋白組，增加最少的是四氯化碳組。
　?、贖E染

4、色結合天狼猩紅染色，光鏡檢查發(fā)現(xiàn):與其他組相比較，四氯化碳組的肝臟顯示嚴重纖維化，但其腎纖維化不明顯;模型組肝纖維化程度顯著遜于四氯化碳組，但腎臟可見局灶性間質性炎癥和結締組織增生;牛血清白蛋白組和對照組無肝纖維化，前者腎臟病變與模型組相似。
　　③免疫組織化學染色顯示，四氯化碳組、模型組肝臟內α-SMA陽性細胞顯著增加，但前者較后者更多;在4組中，僅模型組可見腎臟內部分細胞α-SMA陽性。
　?、苊庖邿晒鈾z測顯示，模型組I

5、gG和IgM沿腎小球毛細血管壁分布為主，呈現(xiàn)中等強度顆粒狀熒光;牛血清白蛋白組和四氯化碳組僅IgM陽性，但前者主要沿腎小球毛細血管壁分布，后者主要分布于系膜區(qū)。
　?、蓦婄R觀察顯示，在模型組腎小球中，毛細血管基底膜均質狀增厚，失去3層結構;上皮下纖維樣電子致密物呈串珠狀沉積;足細胞腫脹，線粒體嵴變短;腎小管上皮細胞內易見老化線粒體;牛血清白蛋白組超微結構改變與模型組差別在于電子致密物偶見于內皮側和基底膜內，上皮下未見電子致密物沉積

6、。其余兩組因制樣失敗未能觀察超微結構改變。
　?、扪迳瘷z查顯示，四氯化碳組肝臟受損的生化參數(shù)最高，牛血清蛋白組最低。
　?、吣蛞簷z查:模型組24小時尿量和尿蛋白量在各組中最高。
　　結論:
　?、俾?lián)用四氯化碳和牛血清白蛋白初步建立了肝腎纖維化復合動物模型。
　?、诟卫w維化的病理改變較重;腎纖維化病理改變輕，尚處于疾病的早期階段。
　　③牛血清白蛋白對四氯化碳性肝損傷有一定拮抗作用，在后續(xù)的造模探索