紅景天苷抗高原缺氧作用研究.pdf

1、目的：高原現(xiàn)場(chǎng)下研究紅景天苷對(duì)H9C2心肌細(xì)胞形態(tài)和增殖活性的影響，及對(duì)LDH、MDA、SOD表達(dá)活性的影響，及對(duì)線粒體膜電位和caspase表達(dá)的影響，從而揭示低壓低氧環(huán)境下紅景天苷的抗缺氧作用，并為多種缺血缺氧疾病的治療提供新的思路和方法。
　　方法：1.H9C2低壓低氧培養(yǎng)，按常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)方法接種于含15％胎牛血清的H-DMEM中，5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3d換液傳代一次。
　　2.倒置相差顯微鏡觀察H

2、9C2心肌細(xì)胞的細(xì)胞心態(tài)。
　　3.CCK-8檢測(cè)H9C2心肌細(xì)胞的細(xì)胞活力。
　　4.分別用LDH、MDA、SOD試劑盒檢測(cè)H9C2心肌細(xì)胞內(nèi)LDH的漏出量、MDA的堆積量、SOD的活性改變。
　　5.JC-1檢測(cè)H9C2細(xì)胞線粒體膜電位的變化情況。
　　6.caspase-3多克隆抗體和即用型 SABC-AP(兔 IgG)試劑盒檢測(cè)H9C2細(xì)胞內(nèi)caspase-3蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：1.未加藥時(shí)

3、細(xì)胞增殖情況為，第一天內(nèi)增殖曲線趨勢(shì)呈現(xiàn)下降，7d之內(nèi)的增殖曲線趨勢(shì)為平緩上升，而7-11d時(shí)曲線急劇上升，11d后曲線則逐漸變得平直且趨勢(shì)呈下降，細(xì)胞存活率為95.20%。
　　2.與未加藥時(shí)相比，紅景天苷作用于 H9C2心肌細(xì)胞后，細(xì)胞活力增強(qiáng)，且隨紅景天苷劑量的增加而增強(qiáng)，最強(qiáng)活力為100μg/ml紅景天苷時(shí)，作用時(shí)間的延長(zhǎng)也會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞活力。
　　3.以100μg/ml濃度的紅景天苷作用于H9C2心肌細(xì)胞，隨著作用時(shí)間

4、的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中的LDH表達(dá)水平低于對(duì)照組，且以3d和5d有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.以100μg/ml紅景天苷作用于H9C2細(xì)胞，與對(duì)照組相比，隨著時(shí)間的變化，細(xì)胞內(nèi)MDA表達(dá)水平下降，而SOD的活性則呈增強(qiáng)趨勢(shì)。
　　5.氧自由基增加導(dǎo)致線粒體膜受損害，從而使線粒體膜電位下降,而在加藥紅景天苷（10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml）后的1d，3d，7d，分別用 JC-1染色、熒光顯微鏡檢測(cè)觀察線粒體膜

5、電位的變化：加藥組和對(duì)照組在初期都有紅色熒光，線粒體膜電位反應(yīng)迅速，隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，加藥組和對(duì)照組的紅色熒光對(duì)比明顯，且減弱，綠色熒光增強(qiáng).
　　6.caspase-3多克隆抗體和即用型 SABC-AP(兔 IgG)試劑盒檢測(cè)H9C2心肌細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性，發(fā)現(xiàn)7d內(nèi)紅色熒光逐漸減少，且亮度減弱，說(shuō)明caspase-3蛋白表達(dá)水平下降.
　　結(jié)論：紅景天苷通過(guò)升高SOD活性和降低LDH、MDA含量以維持細(xì)