二烯丙基二硫誘導(dǎo)人胃癌SGC7901-VCR細胞的耐藥逆轉(zhuǎn)及其機制.pdf

1、目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是否具有逆轉(zhuǎn)人胃癌細胞株SGC7901/VCR耐藥的作用,并初步研究DADS逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的機制。
　　方法:MTT法分別檢測DADS對SGC7901和SGC7901/VCR細胞的劑量效應(yīng)曲線,5-Fu對SGC7901/VCR細胞的敏感性和耐藥倍數(shù);DADS對SGC7901/VCR細胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用。流式細胞儀檢測DADS對SGC7901和SGC7901/VCR細

2、胞凋亡的影響;AO-EB熒光染色檢測DADS對SGC7901/VCR細胞凋亡的影響;RT-PCR檢測MDR-1 mRNA基因表達,Western blot檢測P-gp蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.DADS在8mg·L-1以下濃度對SGC7901/VCR和SGC7901細胞無明顯毒性,超過此濃度,其毒性呈劑量效應(yīng);DADS對SGC7901/VCR和SGC7901細胞的IC50分別為49.55mg·L-1和45.21mg·L-

3、1,兩組差異無顯著性(P>0.05)。5-FU對SGC7901/VCR和SGC7901細胞的IC50分別為209.78 mg·L-1和34.16 mg·L-1,耐藥倍數(shù)為6.14,兩組差異有顯著性(P<0.01)。經(jīng)8mg·L-1DADS作用后,SGC7901/VCR細胞對5-FU的敏感性增強,其IC50明顯下降(P<0.01),為73.57 mg·L-1。且5-FU與DADS聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用。
　　2.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示

4、,8mg·L-1 DADS作用SGC7901/VCR細胞48h后,SGC7901/VCR組、5-Fu組、DADS組、5-Fu+DADS組的凋亡率分別為(1.75士0.61)％、(4.95士0.14)%、(14.60士0.30)%、(22.60土0.20)%。DADS組、5-FU+DADS組與對照組、5-Fu組比較有顯著性差異(P<0.05)。
　　3.AO-EB染色結(jié)果顯示,8mg·L-1 DADS作用 SGC7901/VCR細胞

5、48h后,SGC7901/VCR組、5-Fu組、DADS組、5-Fu+DADS組的凋亡率分別為3.9%、8.25%、23.50%、31.50%。DADS組、5-FU+DADS組與對照組、5-Fu組比較有顯著性差異(P<0.05)。
　　4.RT-PCR結(jié)果顯示,8mg·L-1 DADS作用SGC7901/VCR細胞48h后,SGC7901組、SGC7901/VCR組、5-Fu組、DADS組、5-Fu+DADS組的mdr1/β-ac

6、tin比值分別為0.457±0.673、0.881±0.543、0.860±0.380、0.635±0.140、0.585±0.214。DADS組、5-Fu+DADS組SGC7901/VCR細胞內(nèi)MDR-1基因表達較對照組和5-Fu組明顯降低(P<0.05)。
　　5.Western-blot結(jié)果顯示,8mg· L-1 DADS作用 SGC7901/VCR細胞48h后,SGC7901組、5-Fu組、DADS組、5-Fu+DADS組

7、的P-gp/β-actin比值分別為0.894±0.749、0.547±0.103、0.828±0.127、0.652±0.112、0.659±0.878。DADS組、DADS+5-Fu組SGC7901/VCR細胞內(nèi)P-gp蛋白表達較對照組和5-Fu組明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.8mg·L-1以上濃度的DADS對SGC7901及SGC7901/VCR細胞的生長均有抑制作用,且 SGC7901/VCR細胞株