華貴櫛孔扇貝卵黃蛋白原基因克隆表達及其免疫功能的初步研究.pdf

1、華貴櫛孔扇貝(Chlamysnobilis)以其貝殼具有橙色、橙紫色、紫色、褐色等多種絢麗的色彩而聞名。因其營養(yǎng)豐富、味道鮮美、生長快、養(yǎng)殖周期短、經(jīng)濟效益高，自上世紀70年代就已經(jīng)成為我國南方重要的海水養(yǎng)殖貝類。
　　卵黃蛋白原(Vitellogenin,Vg)作為卵黃蛋白(Yolkprotein,Vn)的前體，廣泛存在于卵生非哺乳類性成熟動物中，在卵子和胚胎的發(fā)育過程中具有重要的作用，不僅能為發(fā)育中的動物胚胎提供氨基酸、脂肪、

2、碳水化合物等營養(yǎng)物質(zhì)，還能轉(zhuǎn)運類胡蘿卜素、維生素等功能性物質(zhì)，此外，還在生物體內(nèi)參與免疫防御過程，具有免疫功能。
　　本文以華貴櫛孔扇貝橙色和褐色個體為材料，首次克隆了Vg基因的全長cDNA，并進行了同源性分析、時空表達分析及其與類胡蘿卜素含量、總抗氧化能力的關系的研究，初步分析Vg基因免疫相關功能及其作用機理。主要結果如下：
　　1、Vg基因全長cDNA序列的克隆。采用同源克隆結合RACE-PCR的方法，首次克隆得到華貴櫛

3、孔扇Vg基因的全長cDNA序列，全長7760bp，共編碼2289個氨基酸殘基。取21個物種做同源分析發(fā)現(xiàn)，櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)和蝦夷扇貝(Mizuhopectenyessoensis)顯示出更近的親緣關系，先匯成一支后與華貴櫛孔扇貝匯聚，之后依次與其它海洋貝類、昆蟲、蝦、蟹等節(jié)肢動物聚類，最后與脊椎動物類聚。
　　2、VgmRNA時空表達分布。采用熒光定量PCR技術檢測VgmRNA在不同組織不同發(fā)育時期的表達水

4、平變化，結果顯示，VgmRNA具有組織表達特異性和性腺發(fā)育水平相關性。VgmRNA在卵巢中大量表達，在精巢及其他組織中只有痕量表達；VgmRNA在生長期表達水平較高，在成熟期顯著下降，在排卵后期又恢復到較高水平。
　　3、Vg與類胡蘿卜素含量、總抗氧化能力的關系。通過對卵巢VgmRNA表達水平、類胡蘿卜素含量及總抗氧化能力的測定，發(fā)現(xiàn)VgmRNA表達水平與類胡蘿卜素含量，VgmRNA表達水平與總抗氧化能力、類胡蘿卜素含量與總抗氧化

5、能力之間存在顯著的(P<0.05)正相關性。
　　4、VgmRNA在感染實驗中的變化。在雌性個體的性腺中注射17β-雌二醇，通過熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)其可以誘導VgmRNA的表達，證明17β-雌二醇可以促進華貴櫛孔扇貝Vg的合成。通過對華貴櫛孔扇貝進行鰻弧菌感染實驗，發(fā)現(xiàn)Vg在鰻弧菌感染24h內(nèi)出現(xiàn)先上升后下降的趨勢，表明Vg對華貴櫛孔扇貝應對細菌感染有一定相關性，可能起到免疫防御的功能。由于類胡蘿卜素可以通過干擾代謝或基因互作在

6、基因的表達和調(diào)節(jié)，我們推測類胡蘿卜素在Vg行使免疫防御功能的時候起著重要作用。
　　本研究首次獲得華貴櫛孔扇貝Vg基因全長cDNA序列，同時研究了VgmRNA空間表達特性，為今后開展Vg基因表達與調(diào)控的研究提供了理論依據(jù)；本研究首次將VgmRNA表達水平和類胡蘿卜素含量及總抗氧化性聯(lián)系起來，給Vg免疫功能的研究提供了新角度；Vg作為一種具有免疫活性的分子，在軟體動物的非特異性免疫中能夠發(fā)揮作用，這也為探索貝類新的免疫途徑，改善貝類