簡介：該實驗綜合運用DNA在片延伸、固相PCR、分子雜交、酶學信號放大等生物芯片技術(shù)建立了一種用DNA芯片快速檢測漢坦病毒并進行基因分型的方法探討其臨床應用價值實驗利用等位基因特異性PCR的原理通過GENEBANK搜索所有漢坦病毒基因組片段比對分析各亞型的分型點設計出各亞型的分型引物在引物的5端的磷酸基團上進行CH26SSCH26POLYT10修飾利用二硫鍵將分型引物固定于芯片表面采用固相PCR在片延伸病毒特異DNA片段同時采用半巢式PCR以提高擴增效率只有引物與模板完全配對時PCR才能夠正常進行DNA在片延伸過程中通過生物素修飾的DUTP將生物素摻入DNA雙鏈利用親和素交聯(lián)的堿性磷酸酶對PCR結(jié)果進行芯片酶學檢測檢測結(jié)果表明該方法能夠在芯片上檢測并區(qū)分漢坦病毒S基因的多個型別靈敏度可達到05NGΜL用此DNA芯片系統(tǒng)檢測臨床實際病毒樣品檢測結(jié)果與用血清學方法檢測得到的已知型別結(jié)果完全吻合

簡介：南開大學碩士學位論文乙肝病毒X蛋白通過長非編碼RNAHULC促進肝癌細胞增殖的作用及分子機制研究姓名杜玉梅申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師張曉東；葉麗虹201205摘要轉(zhuǎn)錄因子CREB上調(diào)HULC的表達。第二部分LNCIⅢAHULC促進肝癌細胞增殖的作用HULC對肝癌細胞調(diào)節(jié)的功能不清。為了探討HBX是否通過HULC促進肝癌的發(fā)生發(fā)展，應用MTT方法檢測了瞬時過表達HULC對L02肝細胞增殖的影響。結(jié)果顯示，過表達HULC可明顯促進肝細胞增殖，呈時間依賴性；反之，在L02X和HEPG2X中干擾HULC則可抑制上述細胞的生長，呈時間依賴性。EDU檢測顯示，在HEPG2X細胞中干擾HULC可顯著抑制肝癌細胞的增殖；克隆形成實驗顯示，在HEPG2X細胞中干擾HULC可明顯降低細胞的克隆形成能力裸鼠動物成瘤實驗結(jié)果顯示，在HEPG2X細胞中干擾HULC可顯著降低肝癌細胞的成瘤能力，進一步應用REALTIMEPCR檢測，與對照組相比在移植瘤組織中HULC的水平明顯降低。因此，LNCRNAHULC具有促進肝癌細胞增殖的作用。第三部分LNCRNAHULC促進肝癌細胞增殖分子機制的研究為了進_步研究LNCRNAHULC促進肝癌細胞增殖的分子機制，通過檢索HULC基因所在的6P243區(qū)域的編碼基因，發(fā)現(xiàn)HULC基因附近存在SLC3583和抑癌基因P18兩個編碼基因。文獻報道，HULC對SLC3583調(diào)節(jié)作用并不明顯，因此我們探討了HULC對P18的調(diào)控作用。我們首先檢測了上述21例肝癌組織和癌旁組織中P18的表達水平，發(fā)現(xiàn)P18在肝癌組織中的表達水平明顯低于癌旁組織，并且在上述33例肝癌組織中發(fā)現(xiàn)P18的表達水平與HULC的表達水平呈負相關。在HEPG2細胞中干擾HULC，顯示P18的MRNA水平和蛋白水平發(fā)生上調(diào)，呈劑量依賴性。將P18基因1003N349NT克隆到PGL3BASIC載體上，報告基因結(jié)果顯示，該區(qū)域具有啟動子活性。報告基因顯示，在肝細胞L02中過表達HULC可抑制P18的啟動子活性，呈劑量依賴性；當干擾HEPG2細胞中HULC，可激活P18的啟動子活性，呈劑量依賴性。上述結(jié)果表明，HULC通過抑制P18基因的啟動子活性進而抑制P18的表達。MTT分析結(jié)果顯示，雙干擾P18和HULC，發(fā)現(xiàn)干擾HULC可以降低干擾P18促進細胞增殖的能力。檢測動物實驗腫瘤組織中P18的表達水平，結(jié)果顯示在SIHULC組的移植瘤組織中P18蛋白的表達水平明顯高于SICTRL組，進一步證實了SIHULC抑制肝癌細胞增殖的作用與上調(diào)P18有關。

簡介：蘇州大學博士學位論文腺病毒介導重組人源化ING4基因抑制非小細胞肺癌NCIH460細胞生長機制研究姓名段光軍申請學位級別博士專業(yè)內(nèi)科學（呼吸內(nèi)科）指導教師胡華成20080401腺病毒介導重組人源化ING4基因抑制非小細胞肺癌NCIH460細胞生長機制研究中文摘要亡形態(tài)學改變，并出現(xiàn)凋亡小體；RTPCR、WESTERNBLOTTING檢測結(jié)果提示AD．ING4基因以P53依賴方式誘導腫瘤細胞上調(diào)P21和BAX基因表達，下調(diào)BCL．2和SURVIVIN基因表達來誘導腫瘤細胞凋亡；RTPCR和ELISA檢測提示ING4基因可以抑制腫瘤主要血管生成相關基因VEGF表達；體內(nèi)試驗表明AD．ING4基因可以抑制腫瘤生長并抑制腫瘤體內(nèi)血管生成。結(jié)論運用定點突變技術(shù)對MING4進行了人源化改造，并成功重組構(gòu)建了人源化ING4腺病毒表達載體；經(jīng)RTPCR和熒光顯微鏡檢測證實腺病毒AD．ING4可以在非小細胞肺癌NCI．H460細胞株中穩(wěn)定表達；腺病毒AD．ING4在非小細胞肺癌NCI．H460細胞株中表達可致肺癌細胞產(chǎn)生細胞病變CPE，并主要通過誘導細胞凋亡和抑制腫瘤血管生成來抑制腫瘤細胞增殖；腺病毒AD．ING4誘導非小細胞肺癌NCI．H460細胞凋亡的主要分子機制是以P53依賴方式上調(diào)促凋亡因子BAX表達，下調(diào)BCL．2、SURVIVIN表達，誘導腫瘤細胞凋亡；腺病毒AD．ING4同時通過促進P53反應基因P21表達，上調(diào)BAX表達，并改變BAX／BCL．2比例，促進腫瘤細胞凋亡；腺病毒AD．ING4可以抑制腫瘤主要血管生成相關基因VEGF的表達，并在體內(nèi)抑制腫瘤血管生成腺病毒AD．ING4注射可以抑制H460實體瘤腫瘤生長。關鍵詞ING4基因，人；腺病毒；載體；構(gòu)建；基因治療；肺癌，非小細胞II作者段光軍指導老師胡華成

簡介：兒童自我延遲滿足控制能力的認知特征研究益，因此更具有積極的適應意義。二、作為一種能力，自我延遲滿足與個體的認知能力有關聯(lián)，有效的延遲行為要求各種意識狀態(tài)下達成延遲能力的認知能力，包括個體有目的的自我分心、“冷的”C001抽象認知策略、元認知、心理理論、執(zhí)行功能等認知能力的參與，而不僅僅停留在反應抑制上。三、幼兒自我延遲滿足的等待時間受言語表征內(nèi)容的影響，指向任務規(guī)則的“冷”認知言語表征對于提升幼兒的延遲等待時間有顯著的影響作用，尤其是對3～4歲幼兒影響效果更為突出。似乎男孩的道德行為發(fā)展更重視的是規(guī)則和事件本身的價值。四、自我延遲滿足元認知策略知識的發(fā)展水平也是影響兒童延遲滿足的重要因素。隨著年齡的增長，兒童延遲滿足元認知策略知識水平由無知、朦朧的低水平向一致性、自我調(diào)節(jié)的高水平不斷發(fā)展。4歲幼兒基本上處于無知水平；5歲幼兒的元認知知識開始萌芽小學階段，尤其是3年級以后，兒童延遲滿足的元認知策略知識進入一致性水平的平穩(wěn)發(fā)展階段；自我調(diào)節(jié)的元認知水平在6年級兒童身上稍有體現(xiàn)。五、學前兒童在應對延遲滿足的策略使用上也呈現(xiàn)不同的年齡特點，抑制策略在低年齡的中班幼兒中占一定優(yōu)勢，規(guī)則任務性策略在大班中比較明顯。分心策略隨著年齡的增長而成為JL童應對挫折時最常采用的主導策略。六、兒童自我延遲滿足元認知策略知識的發(fā)展呈現(xiàn)一定的規(guī)律性，從具體到抽象，從單維性到多維性，從尋求情景的外部幫助到依靠自我的力量，這些變化與此階段兒童認知思維的發(fā)展密不可分。七、自我延遲滿足與兒童心理理論、執(zhí)行功能在任務、年齡發(fā)展、額葉功能等方面具有關聯(lián)性。隨著兒童年齡的增長，幼兒在這三項能力上都有顯著提高，尤其在4歲階段。八、自我延遲滿足與心理理論、執(zhí)行功能之間存在顯著的正相關聯(lián)，但它們彼此間的關系的影響實質(zhì)在本研究中仍不明確，需要迸一步的實驗研究的驗證。關鍵詞自我延遲滿足外部延遲滿足元認知心理理論執(zhí)行功能U

簡介：蘇州大學碩士學位論文電子束照射半腦后認知功能變化特點及機制的研究姓名李學忠申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師包仕堯田野200241皇王壅璺塾蘭墮亙墜塑墊壁奎垡壁盛墨墊型塑墮塞墮15GV及以上照射組大鼠海馬細胞外液谷氨酸含量在照射后半月增加，谷氨酸含量上升程度與照射劑量有關，到照射后第3月恢復正?；蛏缘?。，F(xiàn)4、1結(jié)論半腦照射可使大鼠學習、記憶能力下降，下降程度與照射劑量有關，照射劑量越大，下降程度越明顯。照射鼠早期學習、記憶能力的下降可能與照射性感覺障礙及海馬細胞外液的氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的變化有一定的關系。一L一關鍵詞半腦照射大鼠學習、記憶能力電刺激敏感性谷氨酸E，T

簡介：第一軍醫(yī)大學碩士學位論文EB病毒與OKADAICACID分別及協(xié)同處理HNE1細胞的蛋白表達譜姓名徐守軍申請學位級別碩士專業(yè)病理學指導教師姚開泰20030606EB病毒與OKADAICACID分別及協(xié)離處理HNEL細胞的蛋白表達譜碩士生指導老師徐守軍姚開泰教授孛文攮要鼻咽癌NASOPHARYNGEALCARCINOMA，NPC是中國南方數(shù)省高發(fā)的鼻疆郄惡性上皮滾瞧黲瘞。囂蘺熬礴究表弱，NPC發(fā)瘸是一令多因素、多階段的過程，主要如EB病毒、化學致癌物以及遺傳等因索相關。血清學以及組織學的迂攥表明，EB病毒與NPC密甥耪關，在NPC纓鼴敷及鼻咽部非典型增生的上皮細胞中都W以檢測到EB病毒，但是在鼻咽部正常上皮細胞中卻寒能檢測到EB瘸毒，表明EB瘸毒可能在NPC發(fā)病的舉期感染了上皮細胞，假其感染細胞的機制以及在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用仍不明確。根攢腫瘤發(fā)生的三階段學談，腫癯促進蠢4在腫瘤發(fā)生中也超到一定的關鍵性作用。岡田酸OKADAICACID，OA作為蛋自磷酸酶1PROTEINPHOSPHATASE1，PPL以及蛋白磷酸酶2APROTEINPHOSPHATASE2A，PP2A的特異性抑制翔，可以顯著增加細胞內(nèi)磷酸化鬣自的含量，是一種有效的腫瘤促進劑，因此OA可以作為研究腫瘤發(fā)生發(fā)展機制的一耱有翊工其。蛋白質(zhì)組學PROTEOMICS技術(shù)是一種新的、簡通量的后基因組研究方法，近警來廣泛魏痤霜予久類疾病，蘢茭是耱癌發(fā)病瓠鍵豹磅究。經(jīng)典的方法主疆通過維電泳分離蛋白，然后質(zhì)譜分析得到肽質(zhì)量指紋圖譜，逶過戮特霹撿褰褥裂鬣鑫戇穗關信患。將蛋憊震維學分輯方?jīng)褢哂贓BV與鼻咽癌關系的研究，有利于從一個嶄新的角度，對鼻咽癌發(fā)生發(fā)鼴壤鍘遴行毒益靛掇索。本課題利用22實駿設計，以空白處理組為陰性對照，分別設立EB病毒、OA和EB病毒BOA實驗組，體終感染或者處理鼻咽痰纓胞系HNE1，麓點分析EB病薄感染前后細胞內(nèi)蛋白寢達譜的變化以及OA在其中可能發(fā)揮蛉作用，從蛋白質(zhì)水平，初步探索EB病毒與NPC的關3一

簡介：青島大學碩士學位論文腸道病毒腦炎患兒腦脊液中IL4IFNΓ失衡與NSE異常表達的相關性研究姓名徐延玲申請學位級別碩士專業(yè)兒內(nèi)科學指導教師陳宗波20070604STUDYTHERELATIONSHIPBETWEENIMBALAUEEOFIL4／IFN丫ANDNEURONSPECIFICENOLASENSEABNORMAIEXPRESSIONINEEREBROSPINALFLUIDFROMCHILDRENWITHENTEROVIRALCENTRALNERVOUSSYSTEMINFECTIONABETRADOBJECTIVE3MROUGHTHEDETECTIONOFIL4AND匣N響CEREBROSPHLALFLUIDFROMCHILDRENWILHENTEROVIRALC啊L仃ALNGTVOTBSYSTEMINFECTINNANDCARRYINGOUTTHECORRELATEDENALYSLSWITHTHEA叩把咖LEVELOFNSELNMTMEPATHOGENESISWITHENTEROVIRALCENTRALNERVOUSSYSTEMINFECTIONWILLBEINVESTIGATECLMETHODILLTHE40CHILDPATIENTSWITHENTEROVH鋤CENTRALNETVOUSSYSTEMINFECTIONAND30NORMALCHILDREN，ANDTHECEREBR刪FLUIDCSFIL4，WNY柚DNSEWE犯DD舊咖山NEDBYELISAMETHOD，THERESULTSOF蜘INATIONWE糟ANALYSEDST毗ISTICAIIY。RESULTIFNYANDNSELEVELSINTHEENTEROVIRALEVCENTRALRLERVOUSSYSTEMINFEC￡】IONWEMMARKEDLYELEVMEDCOMPAREDWILHTHOSEOFNORMALCONUOLSP001，BUTM4LEVELDECREASED啦螄位A圩吐Y；THERESULMOFLINEARCORRELATINNSHOWEDTHATTHEREEXISTSAPOSITIVE∞RRELATINNBETWEENIFNYANDNSEFO765，P001ANEGATIVECORRELATIONBETWEENIFNTAND兒_4RO615，P001ADDITIONALLY，M4ACTIVITYWASNEGATIVELYCORRELMEDTONSELEVELR0656P001THECORRELATIONOFIFNY／IL4ANDNSELSLBEBESTR0799PO01CONCLUSION1FNYAND兒4TAKEPARTINTHEIMMUL∞ATTACKOFENTEROVUAL∞刪NGHVOUSSYSTEMINFECTIONTHEREHASACLOSERELATIONSHIPBETWEⅪNIMBALANCEOFLL4，蜊吖ANDM啪刪幽M夠WITHENTEROVIMLRZNTRALLQRVOOSSYSTEMPOSTGRADUATESTUDENTYENLINGXU口甜H硼B(yǎng)DIRECTEDBYPROFZOUGBECHEAKEYWORDSENTEREVIRUSEV；CENTRALNERVOUSSYSTEM；INTERLEUIDN4IL4；7LATCRFERENIFNT；NENRON4PECILIEEUOLASENSE

簡介：點擊查看更多亞甲基藍-光化學法對血漿中水皰性口炎病毒滅活機制的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文旨在以明膠硅氧烷納米粒子GSNPS為基礎對其進行表面修飾并考察其攜帶質(zhì)粒DNA在細胞和動物水平的轉(zhuǎn)染效率。同時利用變性試劑對HBV病毒樣核心顆粒在體外條件下進行解離與重組考察其作為基因載體的潛力。本文工作主要分為以下三個方面1適配體AGRO100能夠靶向識別A549細胞引入聚乙二醇PEG作為橋聯(lián)劑連接明膠硅氧烷納米粒子與適配體AGRO100并延長了納米粒子在動物體內(nèi)的血液循環(huán)時間。同時進一步在納米粒子表面連接有助于納米粒子在細胞內(nèi)逃逸溶酶體的多肽HA2。通過納米粒子修飾前后粒徑和表面電位的變化證實了聚乙二醇PEG、適配體和HA2成功連接到納米粒子表面。通過靜電力吸附將DNA與GSNPS進行復合然后進行上述的表面修飾并通過瓊脂糖凝膠電泳證實該納米粒子能夠有效載負質(zhì)粒DNA。2通過MTT實驗對明膠硅氧烷納米粒子GSNPS、聚乙二醇和適配體修飾的明膠硅氧烷納米粒子GSPEGAPTNPS和聚乙二醇、適配體和多肽HA2修飾的明膠硅氧烷納米粒子GSPEGHA2APTNPS的細胞生物相容性進行了評價。通過激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀證實GSNPSGSPEGAPTNPS和GSPEGHA2APTNPS均能夠進入A549細胞但是GSPEGAPTNPS和GSPEGHA2APTNPS進入更多量大約為GSNPS的兩倍。同時通過活體成像技術(shù)觀測發(fā)現(xiàn)功能化的納米粒子攜帶質(zhì)粒DNA能夠有效靶向到裸鼠的腫瘤部位并能夠在腫瘤部位實現(xiàn)熒光素酶質(zhì)粒PGL3的有效表達。3利用變性試劑尿素UREA、鹽酸胍GDNHC1或含EGTA和DTT的其他變性試劑來考察HBV病毒樣核心顆粒在體外解離與重組的性質(zhì)。透射電鏡TEM觀測顯示HBV病毒樣顆粒在合適濃度的變性試劑作用下能夠?qū)崿F(xiàn)解離且在移除變性試劑后均能很好地實現(xiàn)病毒樣顆粒的重組且HBV病毒樣核心顆粒和多肽TAT修飾的HBV病毒樣核心顆粒進入細胞后均具有較好的溶酶體逃逸能力。

簡介：背景和目的盤狀結(jié)構(gòu)域受體（DDRS）是在研究表達于人類惡性腫瘤的酪氨酸激酶蛋白時發(fā)現(xiàn)的一種新的受體酪氨酸激酶（RTK）亞家族，其主要作用是感受微環(huán)境中膠原量和構(gòu)型的變化，然后以粘附、遷移、分化、生存、增殖的方式調(diào)節(jié)細胞反應。在哺乳動物中包括DDR1和DDR2兩類。研究顯示，DDR2在肝纖維化等病理過程中發(fā)揮重要作用。我們前期研究的動物實驗表明，在酒精性肝纖維化大鼠模型中，隨酒精灌胃進行與肝纖維化程度進展，DDR2表達呈時間依賴性增加，且DDR2與肝組織內(nèi)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原及血清透明質(zhì)酸、Ⅳ型膠原等均呈正相關，并且在經(jīng)治療肝纖維化減輕的大鼠中，出現(xiàn)DDR2表達下調(diào)，表明DDR2表達與和纖維化程度相關。本實驗進一步分析了盤狀結(jié)構(gòu)域受體2（DDR2）和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）表達在大鼠酒精性肝纖維化發(fā)生中的作用。在以上研究的基礎上，設計并構(gòu)建大鼠DDR2基因的RNA干擾慢病毒載體，包裝病毒顆粒并篩選有效的RNA干擾病毒。為進一步研究DDR2的作用機制與肝纖維化等相關疾病的臨床治療提供RNA干擾工具。方法1、免疫組化檢測DDR2與MMP2在酒精性肝纖維化大鼠中的表達。成年雄性WISTAR大鼠共16只，正常飼養(yǎng)1周后隨機分為2組正常對照組（N組）與模型組（M組）。其中模型組10只，在橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)大鼠的基礎上，給予每日兩次白酒、吡唑混合液胃內(nèi)灌注，白酒折算成酒精后其量及濃度每兩周遞增一次，吡唑按25MGKGD溶于灌胃酒精中。正常對照組（6只）給予等量生理鹽水每日兩次灌胃。模型組與正常對照組均于16周全部處死。取肝組織標本，通過HE染色、MASSON染色觀察肝臟病理學改變，采用免疫組化染色方法觀察DDR2與MMP2在肝組織中的表達。2、DDR2基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定。（1）大鼠DDR2基因RNAI慢病毒載體的制備。根據(jù)在GENEBANK中檢索的大鼠DDR2基因序列，設計3對針對大鼠DDR2基因的SIRNA（SMALLINTERFERENCERNA，SIRNA）序列SIRNA1、SIRNA2、SIRNA3，設計合成含有相應的短發(fā)夾RNA序列并具有AGEⅠ和ECⅠ酶切粘性末端干擾序列的雙鏈DNAOLIGO；PGCSILGFP慢病毒載體經(jīng)AGEⅠ和ECⅠ雙酶切后與雙鏈DNA連接重組，轉(zhuǎn)入用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細胞，進行陽性克隆篩選、PCR和測序鑒定，獲得相應VSHRNA慢病毒重組載體DDR2LVSHRNA。（2）重組VSHRNA慢病毒顆粒的包裝與滴度測定。將DDR2LVSHRNA、PHELPER10和PHELPER20三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞，包裝擴增出相應的重組VSHRNA慢病毒顆粒DDR2LENTISHRNA1、DDR2LENTISHRNA2、DDR2LENTISHRNA3，倍比稀釋法在293T細胞中測定病毒的滴度。（3）有效DDR2VSHRNA慢病毒的篩選。用DDR2VSHRNA慢病毒感染體外培養(yǎng)NRK52E細胞。72小時后在熒光顯微鏡下觀察，根據(jù)細胞內(nèi)綠色熒光蛋白（GFP）的表達情況分析感染效率；5天后收集細胞實時熒光定量PCR法檢測DDR2MRNA的表達水平。2△△CT法計算并比較各組病毒在細胞中對DDR2表達的基因沉默效應，篩選有效的DDR2RNA干擾靶點。結(jié)果1、酒精灌胃造模16周后，模型組大鼠肝組織病理檢查呈典型的輕度肝纖維化表現(xiàn)，肝組織內(nèi)膠原纖維較正常對照組顯著增多（P001）。免疫組化檢測顯示，模型組DDR2、MMP2表達較正常對照組均有顯著性增加（P001），且DDR2在肝組織內(nèi)的分布與膠原纖維分布相一致。2、對重組陽性克隆的PCR鑒定顯示，連接入VSHRNA片段的陽性克隆PCR片段大小為343BP（從載體中切掉24BP），沒有連接入VSHRNA片段的空載體克隆PCR片段大小為306BP，鑒定結(jié)果和預期一致。測序結(jié)果表明合成的各組DDR2VSHRNA核苷酸序列均插入正確。采用慢病毒載體系統(tǒng)在293T細胞中包裝獲得3組重組慢病毒，病毒滴度達到2108TUML。分別感染NRK52E細胞后，熒光顯微鏡下觀察各重組慢病毒的感染效率均達到80％。RTPCR檢測分析顯示，DDR2LENTISHRNA1和DDR2LENTISHRNA3對NRK52E細胞DDR2MRNA表達的抑制效率達到80％以上。結(jié)論1、通過給予橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)及白酒、吡唑混合液灌胃可以成功建立酒精性肝纖維化大鼠模型。DDR2可能通過MMP2介導膠原與肝星狀細胞間的相互作用，參與酒精性肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。2、成功構(gòu)建了3組DDR2基因RNA干擾慢病毒載體。RNA干擾慢病毒載體經(jīng)293T細胞包裝后，可獲得高滴度的重組慢病毒。在NRK52E細胞中篩選出DDR2LENTISHRNA1和DDR2LENTISHRNA3可高效特異性抑制DDR2基因表達，為有效靶點病毒。

簡介：人巨細胞病毒HCMV含有約2025種蛋白質(zhì)其中在介導HCMV感染和病毒復制中有3種蛋白作用最為重要即由FUL82編碼的磷蛋白PP71、FUL83編碼的PP65蛋白和FUL69編碼的PUL69蛋白上述3種蛋白共同的特點是啟動HCMV對宿主細胞的感染和病毒的復制同時在逃逸T淋巴細胞介導的細胞毒性作用中也具有重要作用新近的研究表明在這3種間層蛋白中以FUL82編碼的蛋白PP71的作用最為顯著該PP71蛋白單獨存在時是一種較強的抗原蛋白可刺激機體產(chǎn)生抗體有助于清除病毒在器官移植者HCMV的感染后PP71蛋白的產(chǎn)生可以明顯增強細胞間黏附分子1ICAM1的表達從而引起移植物血管病變和排斥反應在視網(wǎng)膜母細胞瘤PP71蛋白的產(chǎn)生可以引起腫瘤蛋白P105P107P130等的衰變PP71蛋白可以誘導靜止的細胞進入細胞周期并使他們停在G1晚期而這段時期對病毒復制最為有利所以它能夠增加病毒繁殖加快病毒在細胞間傳遞體外將HCMV轉(zhuǎn)染人纖維母細胞后病毒DNA復制效率在共轉(zhuǎn)染FUL82PP71蛋白條件下感染及復制效率增加了80倍研究證實PP71不僅對HCMV的IE1和IE2基因表達有促進作用而且對晚期基因的表達以及病毒向正常宿主細胞的傳播具有促進和加強作用因此BALDICK指出FUL82PP71蛋白可作為抗CMV病毒藥物設計的有效靶點為了進一步研究PP71蛋白基因在大腸桿菌ECOLI中的表達為下一步蛋白的大量表達純化和基因工程抗體庫的篩選奠定基礎該研究進行了以下工作1人巨細胞病毒的培養(yǎng)在傳代培養(yǎng)的人包皮成纖維細胞HFF中接種人巨細胞病毒并在含2﹪小牛血清的DMEM維持液中繼續(xù)培養(yǎng)至絕大多數(shù)的細胞都出現(xiàn)了明顯的細胞病變效應CPE時凍融法收獲細胞保存在70℃免疫組化方法檢測培養(yǎng)細胞中的PP65抗原顯示絕大多數(shù)的細胞已經(jīng)成功感染了巨細胞病毒2人巨細胞病毒PP71基因的克隆及PGEXPP71重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建1利用蛋白酶K法提取HCMVDNA2設計引物、PCR擴增PP71基因目的片段3BAMHI和ECI內(nèi)切酶雙酶切目的片段和質(zhì)粒PGEX4T1并將PP71基因目的片段連接到PGEX4T1上利用氯化鈣法將重組質(zhì)粒PGEXPP71轉(zhuǎn)入DH5A大腸桿菌內(nèi)4提取重組質(zhì)粒PGEXPP71以BAMHI和ECI雙酶切方法和PCR方法初步鑒定重組質(zhì)粒然后測序?qū)P71基因DNA片段的測序結(jié)果與基因庫中的標準序列比較同源性約為996﹪說明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功3PGEXPP71重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達及其表達條件的優(yōu)化當?shù)鞍妆磉_條件為誘導溫度為37℃、誘導時間4H、IPTG濃度0405MMML能高效地表達出分子量約為71KD的目的蛋白與理論分子量一致占菌體總蛋白的30﹪左右

簡介：目的觀察攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的TETON慢病毒載體對人臍帶間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)染表達及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后成骨的影響。方法取第3代人臍帶間充質(zhì)干細胞分組培養(yǎng)實驗組穩(wěn)定轉(zhuǎn)染攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的TETON慢病毒載體并加入10MGL強力霉素未加強力霉素組同實驗組但不加強力霉素空病毒組轉(zhuǎn)染攜帶綠色熒光蛋白的慢病毒載體空白對照組未進行任何處理。結(jié)果①骨形態(tài)發(fā)生蛋白2表達實驗組、未加強力霉素組均有表達且實驗組表達量高于未加強力霉素組P＜005空病毒組、空白對照組未見表達。②堿性磷酸酶染色實驗組可見細胞胞漿中出現(xiàn)大量紅色或紅棕色顆粒未加強力霉素組可見少量紅色顆粒實驗組堿性磷酸酶活性高于未加強力霉素組P＜005空病毒組、空白對照組未見明顯紅色顆粒。⑨茜素紅染色實驗組、未加強力霉素組均可見鈣結(jié)節(jié)形成實驗組較未加強力霉素組礦化結(jié)節(jié)數(shù)量多面積更大空病毒組、空白對照組未見明顯礦化結(jié)節(jié)形成。結(jié)論攜帶HBMP2的TETON慢病毒載體成功轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞并可獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HUCMSCS。強力霉素可使穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HUCMSCS的HBMP2表達量顯著升高成骨能力顯著增強為進一步研究HBMP2誘導HUCMSCS成骨分化治療骨壞死和骨缺損奠定實驗基礎。

簡介：我們的面前有一個世界，它一方面是科學的、認知的，同時，它也是藝術(shù)的、審美的。我們總是在企圖通過各種途徑來接觸和理解這個世界。我們面前的世界，無論它有多么復雜，都可以用幾何圖形進行概括。幾何，我們有理由相信，它是一種方法，在理解科學世界與藝術(shù)世界的過程中，它最為行之有效。幾何代表了人們對世界的一種基本假設，這種基本假設同時具有認知與審美兩種性格。這就形成了兩種不同的切近自然的方式或者說是與自然相處的兩種不同方式，一種方式是認知的，基于一種科學性的理解；另外一種則是審美的，基于一種藝術(shù)性的體驗。這兩種性格又來源于同一個母體，觀念的幾何圖形或者是我們面前這個真實的世界。幾何自身的兩面性給予了它自身對世界的兩面性的理解和把握的能力，藝術(shù)正是依靠了幾何的這種兩面性、它的兩種品質(zhì)來展示面前的這個世界。在藝術(shù)中認知與審美是一對矛盾，這兩種矛盾的品質(zhì)成就了藝術(shù)，又在斗爭中解構(gòu)了藝術(shù)。藝術(shù)的認知功能逐漸遁去，藝術(shù)從它自身兩面性的斗爭中走向終結(jié)，同時又走向新的開始。我們很難說是幾何認知功能的遁去瓦解了藝術(shù)，還是藝術(shù)拋棄了幾何的認知功能，總之，藝術(shù)中的認知的成分卻被體驗的，審美的取代了。因為有一天，我們發(fā)現(xiàn)對于面前的這個世界我們根本無法確證，于是想方設法讓世界自身展示出它自己來。所以，我們要區(qū)分藝術(shù)與現(xiàn)代藝術(shù)。在現(xiàn)代藝術(shù)中，幾何仍舊是一個重要角色，即便是在梵高印象主義的作品中我們也還能找出幾何的痕跡。但是在其中我們已經(jīng)看不出科學的、認知的成分，更多的是審美的，和體驗的，和表現(xiàn)的，這才是藝術(shù)專屬、獨立的品質(zhì)。從形式上看來現(xiàn)代藝術(shù)有走向原始、回到最初的傾向，但是，這卻是一個經(jīng)過思辨后新的開始。

簡介：中山大學博士學位論文通過CD123分子靶向白血病干細胞治療急性髓性白血病的病毒基因治療策略及研究姓名譚麗申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師黃文林20090526【L山人學博I學位論文譚暇白血病的治療，不僅可以清除LSC而且還不會對造血于細胞HEMATOPOIETICSTEMCELL，HSC造成損傷，是AML治療的有效方案。白血病的基因靶向治療是一種值得探索的方案。有效的基因治療依賴于外源基因高效、穩(wěn)定的表達，病毒載體介導的基因轉(zhuǎn)移以其高轉(zhuǎn)染效率和良好的靶向性而成為基因治療中應用最廣泛的技術(shù)手段?；蛑委熒婕鞍谢?、靶基因載體和靶基因的表達調(diào)控。在本課題的研究中我TFJ汞用CDL23分子作為靶，運用分子生物學的技術(shù)和手段對病毒載體進行修飾或加工使其能夠充分地靶向白血病母細胞群及白血病干細胞，以期達到治療白血病的目的。本研究分三部分L、靶基因的選擇首先我們通過體外的細胞實驗確定了對細胞有明顯毒性作用的靶基因即長臂猿白血病病毒的融合基因包膜糖蛋白GIBBONAPELEUKEMIAVIRUS，GALVFMG，研究結(jié)果顯示GALVFMG在AML細胞株HL60細胞中的表達可誘導細胞發(fā)牛融合，形成多核合胞體，融合指數(shù)在轉(zhuǎn)染后的96H達至1153257％，和空載體轉(zhuǎn)染組及空白組相比有顯著的差別P005。多核合胞體的形成可引起伴隨ATP消耗的線粒體失能，導致細胞發(fā)生壞死性死亡，PI染色發(fā)現(xiàn)死亡的多核合胞體在第5天達到總合胞體的約70％，而乳酸脫氫酶的活性在同樣的時間里也達到了約80％。說明多核合胞體的不斷形成導致了細胞死亡的不斷發(fā)牛。我們通過AO／EB染色也發(fā)現(xiàn)GALVFMG轉(zhuǎn)染組的HL60細胞表現(xiàn)為大量的壞死。GALVFMG的表達引起細胞發(fā)生死亡的機制與HSP70的表達增加有關，我們的研究發(fā)現(xiàn)GALVFMG的表達不僅可以誘導HSPT0的表達增高，而且還可以通過阻斷IRBA的降解來抑制NF出活性和核轉(zhuǎn)位，而NFKB的抑制被發(fā)現(xiàn)又可以負調(diào)控HSP70的表達。因此GALVFMG可通過抑制NFRD3對HSP70的表達產(chǎn)生正反饋的作用。根據(jù)上述實驗結(jié)果就選定了GALVFMG基因作為進行自血病基因治療的靶基因。2、重組辛德畢斯病毒載體的構(gòu)建及研究GALV包膜糖蛋白含有表面單位SU和轉(zhuǎn)膜元件TM二個部分。腫瘤基因治療的一個很重要的目標就是發(fā)現(xiàn)新的靶向性的細胞毒基因。由于IL3的A受體即II

簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文編碼鼠CD20腺病毒載體感染的樹突狀細胞誘導抗小鼠淋巴瘤免疫姓名王友臣申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師譚曉華20080501第三軍醫(yī)火學碩士學位論文MCD20／EGFP細胞作為靶細胞，免疫后小鼠脾細胞作為效應細胞，用3個效靶比ET1001、501和25L，用乳酸脫氫酶釋放實驗檢測CTL殺傷率。3體內(nèi)荷瘤實驗取C57BL／6小鼠20只，46周182G，雌性，隨機分為兩組，實驗組AD5／35MCD20感染DCS免疫1次，10只，對照組DL70一3感染DCS免疫1次，10只。具體免疫方法同細胞毒實驗。免疫1周后，以生理鹽水調(diào)整B16F10MCD2研EGFP細胞濃度為2105個／200“1，按每只小鼠2105B16FLOMCD20／EGFP細胞小鼠右后腿上部背側(cè)皮下接種。接種后前14天隔日觀察，14天后每日觀察小鼠成瘤情況，此時尚未成瘤的小鼠繼續(xù)觀察至兩個月。結(jié)果1用G418篩選及流式細胞儀分選技術(shù)相結(jié)合的方法可獲得穩(wěn)定表達MCD20的B16F10MCD20／EGFP腫瘤細胞株，流式細胞儀檢測991％的細胞表達EGFP，997％表達MCD20。2體外細胞毒性T淋巴細胞殺傷實驗在效靶比為1001、501和251情況下，實驗組的殺傷率分別為6383772％，T1533，PO01、477053L％T1423，PO01和2273311％T874，P001，對照組的殺傷率分別為1537O80％、1283284％和11101OL％。實驗結(jié)果有統(tǒng)計學意義。3荷瘤實驗對照組小鼠在接種2105細胞的B16F10MCD20／EGFP細胞后16至18D內(nèi)全部有腫瘤生長，實驗組僅于18D1只、20D2只、24D1只共有4只小鼠成瘤，且腫瘤體積小于對照組。實驗組其余小鼠繼續(xù)觀察至2個月，仍未見腫瘤生長。對照組成瘤率為LOO％，實驗組為40％，兩組間成瘤率有顯著性差異X2857，PO01。提示AD5／35MCD20能產(chǎn)生抗小鼠淋巴瘤的特異性免疫，對CD20的淋巴瘤小鼠有免疫保護作用。結(jié)論AD5／35MCD20免疫小鼠能誘導特異性的細胞毒性T淋巴細胞CTL的產(chǎn)生，其CTL殺傷率與效靶比有關；AD5／35MCD20能產(chǎn)生抗小鼠淋巴瘤的特異性免疫，對CD20的淋巴瘤小鼠有免疫保護作用。關鍵詞樹突狀細胞；腺病毒載體；CD20；淋巴瘤；免疫治療6