比色法羥自由基測定條件的優(yōu)化與應(yīng)用.pdf

1、目的：確定分光光度法體外羥自由基測定的優(yōu)化條件與實際應(yīng)用的意義，為羥自由基的體外檢測與抗氧化劑的篩選提供檢測方法。 方法：采用經(jīng)典的硫酸亞鐵(FeSO<,4>)與過氧化氫(H<,2>O<,2>)Fenton反應(yīng)，以二甲亞酚(DMSO)為羥自由基捕捉劑，對原有的實驗方法作了改進(jìn)；通過試驗確定該檢測體系的主要影響因素以及適宜的范圍；采用正交設(shè)計，分析了三種不同水平的FeSO<,4>、H<,2>O<,2>和DMSO對檢測體系的影響，確

2、定其合理的搭配；對硫脲、還原型谷胱甘肽(GSH)、草莓提取液以及金屬硫蛋白(MT)抗氧化能力的檢測，驗證了檢測體系應(yīng)用的可行性與實際意義。 結(jié)果：以固藍(lán)B鹽代替固藍(lán)BB鹽提高了顯色反應(yīng)的穩(wěn)定性，避免了吡啶的使用。該檢測體系合適的鹽酸濃度范圍為7.5～10mmol/L，合適的反應(yīng)時間為10～40min，F(xiàn)eSO<,4>、H<,2>O<,2>和DMSO的合適濃度分別為3.0～4.0mmol/L；16～32mmol/L和40～60mm

3、ol/L。正交實驗結(jié)果分析FeSO<,4>，過氧化氫和DMSO的極差分別為0.066、0.026和0.020，F(xiàn)eSO<,4>對反應(yīng)體的影響最大，其次為H<,2>O<,2>，DMSO影響最小。檢測體系最優(yōu)的合理搭配是：FeSO<,4>3.6mmol/L；H<,2>O<,2> 24mmol/L，DMSO60mmol/L。檢測結(jié)果3小時內(nèi)穩(wěn)定，重復(fù)測定變異系數(shù)小于6％。GSH與硫脲均具有清除羥基自由基的能力，在40mmol/L的濃度上，清除

4、率分別為43.2％與77.5％，硫脲清除羥自由基的能力較GSH為大。草莓提取液也具有清除羥自由基的作用，當(dāng)草莓提取液加入量為2ml時(相當(dāng)于10g草莓)，清除率能達(dá)33.8％。加入MT含量不同的肝組織勻漿液，其清除羥自由基的能力有明顯差異，鋅誘導(dǎo)組(76.5μg/ml)與對照組(28.5μg/ml)的清除率分別為24。27％與7.85％。 結(jié)論：該檢測體系合適的實驗條件是10mmogl/L HCl；3.6mmol/L FeSO<