岷江百合LrABCF1基因的克隆及功能驗證.pdf

1、ATP結合盒（ATP-binding cassette，ABC）轉運蛋白家族是一類跨膜運輸?shù)鞍准易?，與植物離子運輸、脂質運輸、次生代謝產物轉運和外源物質運輸有關，在不同生物膜轉位過程中發(fā)揮著重要作用。ABC轉運蛋白家族分全轉運子和半轉運子兩種類型。
　　本研究選取ABC轉運蛋白F亞族中的一類—GCN(general controlnon-derepressible)進行研究。野生岷江百合植物ATP結合盒(ABC)轉運蛋白F亞族基因

2、LrABCF1屬GCN家族，篩選自CMV誘導的岷江百合抑制消減雜交cDNA文庫。在矮牽牛中組成型表達增強了轉基因植株對黃瓜花葉病毒(CMV)、煙草脆裂病毒(TRV)和灰霉菌(B.cinerea)侵染的敏感性。我們檢測了岷江百合（L.regale）、宜昌百合（L.leucanthum）、卷丹(L.lancifolium)、野百合（L.brownii）、山丹（L.pumilum）、寶興百合（L.duchartrei）、大花卷丹(L.leic

3、htlinii)、毛百合(L.dauricum)、川百合（L.davidii）、淡黃花百合（L.sulphureum）接種CMV和LMoV后LrABCF1的表達水平，發(fā)現(xiàn)岷江百合LrABCF1基因在接種CMV和LMoV后上調表達，其最大誘導值顯著高于其他9種野生百合。另外，壓力相關激素水楊酸(salicylic acid，SA)和乙烯(ethylene，ET)，以及低溫、高鹽堿和造傷處理顯著誘導LrABCF1的表達。
　　采用RA

4、CE方法克隆岷江百合LrABCF1基因全長序列，發(fā)現(xiàn)該基因全長為2，087bp，含有1，779bp開放閱讀框，可以編碼592個氨基酸。相似性序列對比和系統(tǒng)進化樹分析顯示，LrABCF1蛋白與水稻OsABCF1和擬南芥AtGCN1高度同源。LrABCF1在矮牽牛中的過表達顯著降低了轉基因植株正常生長發(fā)育速度，增強了矮牽牛轉基因植株對CMV、TRV和B.cinerea侵染的抗性，同時提高了PhGCN2和一些在SA信號通路中防御相關基因PhP