納米金標記毛細管電泳超靈敏化學發(fā)光免疫分析及應用研究.pdf

1、納米技術是21世紀最重要的技術之一，它覆蓋了多個領域，包括化學、物理、材料科學、工程學、生物學，甚至醫(yī)學。在過去的十年里，納米金(goldnanoparticles，AuNPs)在生物分子檢測和臨床診斷中的應用已經引起了高度重視，它具有易于合成和表面修飾、強大的催化效應和容易與生物分子結合等優(yōu)良性質。
　　 毛細管電泳(capillaryelectrophoresis，CE)是一類以高壓電場為驅動力，以毛細管為分離通道，以樣品的

2、多種特性為依據的高效分離分析技術，是繼氣相色譜(gaschromatography，GC)和高效液相色譜(high-performanceliquidchromatography，HPLC)之后分析科學的又一重大進展。CE具有分離效率高、樣品消耗量低、分析時間短等優(yōu)點，是一種新穎的微量分離分析技術。
　　 化學發(fā)光免疫分析法(chemiluminescenceimmunoassay，CL-IA)用于定量檢測復雜樣品中的低濃度組分

3、，已經廣泛地應用于臨床診斷研究。CE結合CL-IA將同時具有CE的高分離能力、CL的高靈敏檢測和IA的高特異性，是分析復雜生物樣品的有效手段。
　　 本文首次將AuNPs標記、CE-CL-IA結合起來，發(fā)展了一種新穎的化學發(fā)光免疫分析技術，主要研究內容和創(chuàng)新點如下：
　　 1.首次利用AuNPs作為CL標記物用于毛細管電泳化學發(fā)光免疫分析。AuNPs用來催化luminol-H2O2反應，產生強的CL信號。非競爭免疫反應后

4、，免疫復合物和未反應的標記抗體(Ab*)經CE分離后先后流出毛細管，與CL試劑相遇產生發(fā)光信號。我們選擇常見的人免疫球蛋白G(humanimmunoglobulinG，hIgG)作為目標抗原。在優(yōu)化條件下，免疫復合物和Ab*在5min內得到良好的分離。hIgG的線性范圍為0.008-5μg/mL(R=0.9950)，檢出限為1.14ng/mL(S/N=3)。IgG在人血清中的加標回收率在85.0-107.0％之間。該方法成功應用于病人血

5、清中IgG的定量檢測。
　　 2.首次發(fā)現(xiàn)諾氟沙星和環(huán)丙沙星能夠顯著提高luminol-H2O2化學發(fā)光體系的發(fā)光強度?；谶@種現(xiàn)象，建立了一種CE-CL高靈敏同時檢測諾氟沙星和環(huán)丙沙星的新方法。對CE分離和CL檢測條件的影響進行了系統(tǒng)研究。在優(yōu)化條件下，諾氟沙星和環(huán)丙沙星在4.5min內基線分離。諾氟沙星和環(huán)丙沙星的檢出限(S/N=3)分別達到2.9×10-10和1.1×10-12mol/L，在尿樣分析中的定量限(S/N=10