用于HPLC分析生物胺的熒光衍生試劑的開發(fā)及其應用.pdf

1、多胺是從微生物到高等生物所有生物體內廣泛存在的小分子堿性脂肪族化合物，代表性的物質有腐胺(PUT)、亞精胺(SPD)、精胺(SPM)。多胺在生物體內起著重要的作用，直接參與生物體內的多種生理活動，是生物體生長和細胞代謝所必需的痕量活性物質，生物體內多胺的含量與組織的病變、生長發(fā)育的水平有直接的關系。因此開發(fā)選擇性好、靈敏度高、經濟實用的分析多胺的方法一直是人們關注和研究的熱點之一。反相高效液相色譜柱前衍生熒光檢測法是目前分析生物體內多胺

2、的有效方法之一，但大部分衍生試劑在實際應用中都存在著不同程度的缺陷，比如因分子質量過大，使分離效果降低：因衍生物的疏水性太強，為了得到合適的保留時間，需要增加流動相中的有機溶劑的比例等。 本文為了開發(fā)用于HPLC法分析生物胺的熒光衍生試劑，設計、合成了幾種分子質量較小、疏水性較低的化合物，并測定了光譜性質，探討了它們與多胺類化合物的反應性能以及衍生物的HPLC行為。 熒光衍生試劑的初始原料選擇2-氨基嫻酸、水楊酸、鄰氨基

3、苯甲酸和V—甲基氨基苯甲酸。其中鄰氨基苯甲酸和N—甲基氨基苯甲酸直接把市售的無水物鄰氨基苯甲酸酐和N—甲基氨基苯甲酸酐作為為熒光試劑，而2-氨基煙酸和水楊酸則合成對應的活性酯作為熒光衍生試劑。并選擇己胺和二丙胺，探討了四種熒光衍生試劑與伯胺和仲胺的反應性以及衍生物的光譜性質。結果表明，己胺衍生物顯示出較強的熒光，二丙胺衍生物幾乎沒有熒光。反應性能方面，在四種熒光試劑中鄰氨基苯甲酸酐的反應性最強，在100℃下，反應4h時幾乎定量完成。

4、 選擇性能較好的鄰氨基苯甲酸酐為熒光衍生試劑，柱前衍生HPLC法分析了腐胺、亞精胺及精胺混合溶液中的多胺。結果衍生反應在100℃下，反應5.5h時衍生物的生成量達到最大。在色譜分析條件為流動相：50mmol·L-1磷酸二氫鈉；乙腈=3：2，激發(fā)波長λex=310nm，發(fā)射波長λem=410nm，流速：1.0mL·mim-1，杠溫為37℃時，得到了分離效果好和保留時間適合的色譜圖。 另外，還合成了八種鄰氨基苯甲酸酐類其它化合物