基于人工金屬酶的不對(duì)稱(chēng)氫化和氫甲?；芯?pdf

1、運(yùn)用化學(xué)和生物的方法對(duì)特定功能的蛋白骨架進(jìn)行修飾和改造，與非天然的輔酶相結(jié)合得到具有重要性質(zhì)的蛋白質(zhì)分子稱(chēng)為人工金屬酶。經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，人工金屬酶的構(gòu)建及其在有機(jī)合成領(lǐng)域中的應(yīng)用取得了突飛猛進(jìn)的進(jìn)步。本文分別利用超分子作用力和共價(jià)鍵構(gòu)筑了兩類(lèi)人工金屬酶，并將它們應(yīng)用于不同的有機(jī)反應(yīng)中。
　　首先利用生物素-（鏈霉）親和素蛋白體系，將不同鏈長(zhǎng)的生物素化雙齒膦銠配合物引入到商業(yè)化的（鏈霉）親和素蛋白空腔中，構(gòu)筑了一系列超分子人工金屬酶

2、。選取2-苯基丙烯酸為模型底物，考察了該類(lèi)人工金屬酶對(duì)2-苯基丙烯酸的催化加氫的反應(yīng)活性和立體選擇性，通過(guò)反應(yīng)條件優(yōu)化和人工金屬酶篩選，最高取得了100%的轉(zhuǎn)化率和73%的ee值。
　　其次，表達(dá)和純化鏈霉親和素蛋白及其突變體，與催化活性的生物素化雙齒膦銠配合物特異性結(jié)合形成超分子人工金屬酶并考察此類(lèi)人工金屬酶對(duì)苯乙烯氫甲?；拇呋阅?。我們?cè)O(shè)想通過(guò)AutoDock計(jì)算指導(dǎo)人工金屬酶的改造，為此選取了關(guān)鍵中間體作為小分子配體，選取

3、鏈霉親和素蛋白作為受體進(jìn)行AutoDock計(jì)算，在對(duì)計(jì)算結(jié)果分析并作出預(yù)估測(cè)后，我們按照計(jì)算結(jié)果對(duì)人工金屬酶進(jìn)行氨基酸定點(diǎn)突變改造及改變催化中心在蛋白空腔中的位置，然后進(jìn)行氫甲酰化實(shí)驗(yàn)，該人工金屬酶及具有一定的區(qū)域選擇性和立體選擇?？疾旆磻?yīng)的區(qū)域選擇性和立體選擇性，通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)二者基本一致，這表明AutoDock計(jì)算結(jié)果在一定程度上可以指導(dǎo)人工金屬酶的改造。
　　最后，選取HaloTag蛋白作為骨架蛋白，與