流動(dòng)-酶催化化學(xué)發(fā)光新體系的研究與應(yīng)用.pdf

1、本文綜述部分簡(jiǎn)要介紹了化學(xué)發(fā)光分析的基本情況、發(fā)展以及應(yīng)用。流動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析法具有儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、分析速度快、靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，所以越來(lái)越受到分析化學(xué)工作者的重視。本文基于魯米諾-過(guò)氧化氫體系的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和血紅蛋白(Hb)作為酶催化劑，采用固定化酶和可更新表面聯(lián)用流動(dòng)注射等技術(shù)，建立了測(cè)定抗壞血酸、膽固醇及免疫球蛋白G的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法。研究報(bào)告包括以下三部分： 1．基于抗壞血酸對(duì)Lu

2、minol-HRP-H<,2>O<,2>體系化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抑制作用，結(jié)合固定化酶技術(shù)，建立了一種簡(jiǎn)單、快速檢測(cè)抗壞血酸的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析新方法。該方法線性范圍為4.0×10<'-8>～4.0×10<'-4>mol/L，檢測(cè)限為1.6×10<'-8>mol/L。 2．利用血紅蛋白(Hb)作為模擬酶催化H<,2>O<,2>與魯米諾的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，將該反應(yīng)與膽固醇氧化酶(COD)催化氧化膽固醇生成H<,2>O<,2>的反應(yīng)偶合，聯(lián)

3、用流動(dòng)注射分析技術(shù)，建立了測(cè)定膽固醇的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法。該方法用于測(cè)定人體血清中的游離膽固醇及總膽固醇含量，結(jié)果令人滿意。進(jìn)樣頻率為30個(gè)/小時(shí)，游離膽固醇線性范圍為5.6×10<'-7>mol·L<'-1>～3.8×10<'-5>mol·L<'-1>，檢測(cè)限為3.0×10<'-7>mol·L<'-1>：總膽固醇線性范圍為1.1×10<'-6>mol·L<'-1>～4.3×10<'-5>mol·L<'-1>，檢測(cè)限為1.5×10<

4、'-7>mol·L<'-1>。 3．將羊抗人IgG抗體(第一抗體)固定于包被有蛋白A的Sepharose 4B FastFlow凝膠微珠表面制成固相抗體，用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗人IgG抗體作為第二抗體，在自制的微型流通式反應(yīng)器中與人IgG進(jìn)行免疫反應(yīng)生成雙抗體夾心式抗原．抗體復(fù)合物。該復(fù)合物中含有的HRP能夠催化發(fā)光底物增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光，其發(fā)光強(qiáng)度與人體血清中IgO的含量成良好的線性關(guān)系。由于包被有蛋白A的Sephar

5、ose 4FF凝膠微珠顆粒非常小(45-165μm)，每次測(cè)定所需的第一抗體隨包被有蛋白A的Sepharose 4FF凝膠微珠進(jìn)入微型流通式反應(yīng)器中，完成一次測(cè)定后微珠即隨廢液一起排出。從而用自制的微型流通式反應(yīng)器建立了流動(dòng)注射可更新表面非均相增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定人體血清中的免疫球蛋白G的新方法。體系經(jīng)優(yōu)化后，檢出限為0.01mg/L，分析速率達(dá)到10次/h，校正曲線的線性范圍為0.05～3.0mg/L。本法已成功地應(yīng)用于人血清中Ig