抗Bt-Cry1Ac單克隆抗體和納米抗體的制備及其在免疫學分析中的應用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Bt-Cry蛋白是一種十分普遍的抗蟲轉基因蛋白,其中Cry1Ac蛋白是一種典型的并且被廣泛研究的Bt蛋白。Bt蛋白不僅存在于很多抗蟲轉基因作物中,如玉米、土豆、棉花和水稻等,而且產(chǎn)量也在逐年增加。由轉基因作物引起的生態(tài)風險、環(huán)境問題日益受到全球關注,轉基因食品的安全性和可靠性都令人擔憂,因此,對產(chǎn)品中轉基因成分的監(jiān)測非常重要。Bt蛋白檢測技術中以 ELISA為主,其中最常用到的抗體為傳統(tǒng)單克隆抗體和多克隆抗體,也有部分應用到單鏈抗體和納

2、米抗體等基因工程抗體。傳統(tǒng)抗體特異性強,靈敏度高,而基因工程抗體尤其是納米抗體,分子量小,穩(wěn)定性高,易于表達和改造。
  本文以Cry1Ac蛋白為靶抗原,采用傳統(tǒng)單克隆抗體制備技術和噬菌體展示技術分別制備抗Cry1Ac單克隆抗體和納米抗體,并將其用于免疫學分析,實驗結果如下:
  1 Cry1Ac鼠單克隆抗體的制備及其在免疫學分析中的應用
  采用雜交瘤細胞篩選技術,將Cry1Ac蛋白免疫小鼠,取小鼠脾臟B細胞與骨髓瘤

3、細胞融合,經(jīng)3~5次亞克隆和非競爭間接ELISA鑒定,最終篩選出8株抗Cry1Ac單克隆抗體;抗體疊加ELISA初步分析單克隆抗體3A5和9F10能識別不同的抗原表位;以單克隆抗體8A8為捕獲抗體,酶標抗體9F10-HRP為檢測抗體,建立雙抗夾心ELISA,線性范圍0.98~30ng/mL,最低檢測限0.1ng/mL。
  2 Cry1Ac納米抗體的研制及其免疫學分析
  采用噬菌體展示技術,以Cry1Ac蛋白為靶分子,從駝

4、源天然納米抗體庫中淘選出3種具有不同序列的能特異性結合 Cry1Ac的噬菌體,然后提取噬菌體DNA,構建pET25b表達載體并轉化至E.coli Rosetta感受態(tài)細胞,經(jīng)IPTG誘導表達、Ni柱純化獲得了3種抗 Cry1Ac納米抗體。最后采用雙抗夾心ELISA分析8種單克隆抗體與3種特異性噬菌體、3種特異性噬菌體與3種納米抗體以及3種納米抗體與8種單克隆抗體之間的匹配效果,并以最佳配對組合建立雙抗夾心ELISA標準曲線,線性范圍分別

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