高效石油降解菌株的篩選與應(yīng)用研究.pdf

1、近些年來(lái)，隨著對(duì)石油的不斷開(kāi)采，在開(kāi)采和運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，石油污染土壤顯然是在所難免的，而采油過(guò)程中的落地油對(duì)周圍土壤的污染是最為嚴(yán)重。這些高濃度原油的揮發(fā)嚴(yán)重污染周圍的空氣，而且在降雨過(guò)程中隨著雨水迅速遷移，擴(kuò)大土壤的污染面積，還會(huì)隨雨水流入附近的河道，直接威脅到環(huán)境和人們的健康。所以，探索一套針對(duì)高濃度原油污染土壤的有效修復(fù)技術(shù)，對(duì)于解決油田的環(huán)境污染問(wèn)題具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和社會(huì)效益。
　　微生物修復(fù)技術(shù)被認(rèn)為是生物修復(fù)中最具前景

2、的技術(shù)，該技術(shù)主要是利用某些具有石油降解功能的微生物，通過(guò)其生長(zhǎng)、繁殖及代謝過(guò)程來(lái)去除土壤中石油烴類及各種有毒有害有機(jī)物。與傳統(tǒng)的物理修復(fù)和化學(xué)修復(fù)技術(shù)相比，油污染土壤的生物修復(fù)技術(shù)具有費(fèi)用低、效果好、處理方便、無(wú)二次污染等優(yōu)點(diǎn)，受到人們的廣泛青睞。
　　本課題從對(duì)實(shí)際油污染土壤的理化性質(zhì)及微生物種群結(jié)構(gòu)分析入手，利用選擇性培養(yǎng)基馴化、富集油污染土壤中的石油降解菌株，并通過(guò)平板劃線法從中篩選出兩株高效的石油降解菌株，分別為生1和生

3、11B。
　　通過(guò)分子生物學(xué)手段對(duì)這兩株菌的16SrDNA進(jìn)行克隆測(cè)序后，可以確定菌株生1與Bacillus flexus屬的相似性為100％，生11B與Pseudomonas pseudoalcaligenes菌屬的相似性為99%，并用生物學(xué)軟件分析它們的系統(tǒng)進(jìn)化地位；通過(guò)平板培養(yǎng)和掃描電鏡觀察了這兩株菌的菌落及形態(tài)特征；通過(guò)靜態(tài)試驗(yàn)確定了兩株細(xì)菌的代謝特性，并確定其最佳的生長(zhǎng)條件；通過(guò)紅外光譜對(duì)生1和生11B在代謝的過(guò)程中產(chǎn)生

4、的生物表面活性劑進(jìn)行了定性分析，結(jié)果表明其對(duì)柴油有較好的乳化作用；通過(guò)靜態(tài)實(shí)驗(yàn)確定了影響細(xì)菌生長(zhǎng)的部分生態(tài)因素pH值、N/P、投菌量、H2O2投加量等對(duì)石油降解率的影響，發(fā)現(xiàn)在單因素影響下，pH值在6.5～7.0、N/P為6:1～9:1、菌投加量為6mL/30mL時(shí)石油的降解率最高，一般培養(yǎng)15d降解率達(dá)到穩(wěn)定，并且在一定范圍內(nèi)增加H2O2的投加量有利于石油降解率的提高。
　　在實(shí)驗(yàn)室生物泥漿法的小試過(guò)程中，利用實(shí)際土壤研究pH值