基于核酸擴增技術的熒光生物傳感器及其應用于microRNA檢測研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文詳細介紹了microRNA（miRNA）的功能及檢測方法、核酸等溫擴增技術以及熒光光譜檢測技術等，同時將核酸等溫擴增技術引入熒光生物傳感器的構建中，對多種miRNA進行了超靈敏檢測。在第一個實驗方案中，構建了一種基于支鏈滾環(huán)擴增耦合內切酶信號放大作用的熒光生物傳感器，實現(xiàn)miRNA-155的超靈敏分析。當在目標物miRNA-155存在的情況下，miRNA-155首先將發(fā)夾探針1打開，引發(fā)主干滾環(huán)擴增反應，反應產(chǎn)物打開發(fā)夾探針2后引發(fā)

2、支鏈滾環(huán)擴增反應。該支鏈滾環(huán)擴增反應產(chǎn)物將分子信標打開后形成了Nb.BbvCI的作用位點，進而引發(fā)Nb.BbvCI對分子信標的循環(huán)切割反應，最終使得大量分子信標被切斷并極大地增強了熒光信號強度和檢測的靈敏度。
　　在第二個實驗方案中，構建了一種靈敏度高、特異性強而且操作非常簡單的熒光生物傳感器，實現(xiàn)對miRNA-122的超靈敏分析檢測。當在目標物miRNA-122存在的情況下，其首先與發(fā)夾探針結合進而與輔助探針結合，在phi29

3、DNA聚合酶和Nb.BbvCI的作用下實現(xiàn)了目標物miRNA-122的循環(huán)利用、Nb.BbvCI作用位點的形成、次級目標物的形成和循環(huán)利用，同時也產(chǎn)生了許多作為滾環(huán)擴增反應引物的單鏈DNA分子。該引物分子與環(huán)狀模板DNA結合后引發(fā)滾環(huán)擴增反應，其產(chǎn)物又能夠將分子信標打開并形成Nb.BbvCI的作用位點，從而在Nb.BbvCI的作用下對結合在滾環(huán)擴增產(chǎn)物上的分子信標進行循環(huán)切割作用，使得大量發(fā)夾型的分子信標被切斷并極大地增強了熒光信號強度

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