基于磁分離富集核酸適配體傳感器檢測食品中抗生素殘留.pdf

1、本研究基于納米過氧化物聚合物編碼探針、磁性分離技術(shù)以及競爭性免疫方法構(gòu)建了一系列簡單、快速、靈敏、低成本的比色適配體傳感器方法，進行實時檢測食品中的氯霉素（chloramphenicol，CAP）殘留。構(gòu)建的免疫分析方法使用磁性納米復(fù)合物材料作為捕獲探針，不僅簡化了分離步驟，還增加了目標(biāo)物的富集量；分別使用生物高聚物Powervision、Envision作為載體，進一步負載金屬編碼標(biāo)簽（納米金Au、氧化鈀PdO）制備不同的信號探針。負

2、載在捕獲探針上的適配體代替抗體識別靶分子發(fā)生特異性免疫反應(yīng)形成免疫復(fù)合物。磁性分離后，信號探針上的納米過氧化物酶復(fù)合物與顯色劑發(fā)生顏色反應(yīng)，可裸眼觀察進行定性，也可進行紫外可見光譜分析進行定量。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴構(gòu)建了一種基于膠體金納米顆粒標(biāo)記 PowerVision（PV）試劑作為信號探針并結(jié)合磁性分離原理的新型比色適配體傳感器進行靈敏性、選擇性地檢測氯霉素。在該測定方法中，CAP的適配體固定在Fe3O4@Au納米粒子

3、用作捕獲探針富集CAP?；パaDNA鏈（cDNA）和 PV共同標(biāo)記到膠體金納米粒子上，形成納米過氧化物聚合物作為信號探針。而信號探針能夠通過核酸適體和 cDNA雜交作用形成AuMNPs-Apt/cDNA-AuNPs-PV復(fù)合物。在CAP的存在下，適配體優(yōu)先結(jié)合CAP并在磁性作用下使得部分信號探針解離。負載在信號探針上的PV可以大大催化3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應(yīng)，這種顏色變化能夠通過紫外可見光譜法進行定量。⑵構(gòu)建

4、了一種基于適體的比色測定法測定CAP,該方法主要利用了抗單鏈DNA抗體(anti-ssDNA Ab)高特異性地識別單鏈DNA的能力以及PV的高催化能力。核酸適配體的互補固定到磁性納米顆粒上作為捕獲探針，anti-ssDNA Ab和PV共同結(jié)合到膠體金納米顆粒上形成信號探針，通過 anti-ssDNA Ab識別 ssDNA得到包含放大探針的磁珠(AuMNPs-cDNA@anti-ssDNA Ab/PV-AuNPs)。磁珠上的PV能夠可以大

5、大催化3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺發(fā)生顏色變化，通過紫外可見光譜法進行定量。構(gòu)建的方法已經(jīng)成功應(yīng)用于真實樣品檢測中，檢測結(jié)果與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫方法相一致。⑶構(gòu)建了一種新穎的比色適配體傳感器用于快速檢測魚肉和鵝肉中氯霉素（Chloramphenicol，CAP）。該研究結(jié)合了核酸適配體特異性結(jié)合目標(biāo)物的高選擇性能和氧化鈀納米顆粒（PdO）標(biāo)記聚合酶螯合物上（EnVision，EV）的信號放大效應(yīng)，能特異性、靈敏性地檢測樣品中痕量氯霉素。

6、EV上含有大約100個辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP），它能夠高效催化底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）產(chǎn)生顏色變化，并且PdO在一定程度上也能催化TMB出現(xiàn)藍綠色，因此該方法可達到雙重放大效果。同時，通過測定TMB吸光度的變化能對應(yīng)計算真實樣品中的氯霉素含量。結(jié)果表明，在最佳實驗條件下，該方法具有較高的檢測靈敏度并在0.02-150 ng mL-1范圍內(nèi)具有良好的相關(guān)性，檢測下限是0.