自催化重組藻膽蛋白結構與功能的關系.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、藻膽蛋白是一類結構相似的色素蛋白。根據(jù)它們的吸收光譜，藻膽蛋白可分為藻藍蛋白(phycocyanin，簡稱PC)、藻紅蛋白(phycoerythrin，簡稱PE)和別藻藍蛋白(allophycocyanin，簡稱APC)，在某些沒有藻紅蛋白而具有異形胞的藍藻中，還有藻紅藍蛋白(phycoerythrocyanin，簡稱PEC)。細菌光敏色素和別藻藍蛋白都是能與PCB發(fā)生自催化重組的藻膽蛋白。細菌光敏色素AphA具有高效可逆光致變色性質，

2、其分子量小，結構簡單，在研究可逆光致變色的動態(tài)過程和設計光控分子器件等方面具有優(yōu)勢。為研究aphA的結構與功能的關系，利用分子生物學方法得到了缺失突變體AphA(26-320)，AphA(27-320)，AphA(28-320)，AphA(29-320)，AphA(32-320)，以此與色素PCB進行體外重組實驗。結果表明，只有缺失突變體AphA(26-320)能與PCB進行自發(fā)的體外重組。這說明維系細菌光敏色素aphA與色素自催化連接

3、的裂合酶結構域位于AphA(26-320)包含的肽鏈中，肽鏈N端的進一步缺失將導致裂合酶活性的喪失。本實驗室研究推測：別藻藍蛋白缺失突變體ApcE(1-240)中Cys-196是色素結合位點，ApcE(1-240)與CpcB，ApcB同源的結構域中的絲氨酸若突變?yōu)榘腚装彼嵋矐哂信cPCB發(fā)生自催化重組的功能。為了證實這兩種推測，我們通過megaprimerPCR構建了不含Cys的突變體apcE(1-240)(C196I)，并在此基礎上構

4、建了突變體apcE(1-240)(C196I,S158C)。表達蛋白質ApcE(1-240)(C196I)和ApcE(1-240)(C196I,S158C)，通過其與PCB的重組反應，表明Cys-196確實是重組中的色素結合位點，而ApcE(1-240)與CpcB，ApcB同源的結構域中的絲氨酸若突變?yōu)榘腚装彼釁s不具有與PCB發(fā)生自催化重組的功能。為找到比ApcE(1-240)分子量更小、水溶性更好且同樣具有與PCB發(fā)生自催化重組功能的

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